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ラングリッサーI II 機種：PS 作曲者：岩垂徳行、楠雅弘、幡谷希久子 開発元：メサイヤ 発売元：メサイヤ 発売年：1997年 概要 初代『ラングリッサー』と『ラングリッサーII』のアレンジ作品である『デアラングリッサー』のカップリング移植作。 BGMはプレイステーションの音源に合わせたアレンジがされている他、「Ｉ」では6曲の追加BGMがある。 ただし権利上の問題で初代『ラングリッサー』のBGMは使われていない。 翌年にはセガサターンで『ラングリッサー Dramatic Edition』として移植された。 2019年に発売された同名タイトルの収録曲については『ラングリッサーI&II(2019)』を参照。 収録曲 曲名 作・編曲者 補足 順位 味方1(Neo-Holy War) 味方2(Knights errant) 味方3(No Surrender) 味方4(Fight It Out) 味方5(The Legend of Sword) 味方6(Soldier) 味方7(Last Battle) 味方援軍1(One’s Side) 味方援軍2 味方援軍3 敵1レオン 敵2バルガス 敵3モーガン 敵4邪悪なるもの 敵5エグベルト 敵6イメルダ 敵7ダークプリンセス 敵8ボーゼル 敵9ベルンハルト 敵 援軍1(Reinforce of Enemy) 敵 援軍2 ショップ ストーリー スタッフロール 兄貴 レクイエム ステージクリア2 エンディング2(A Story Forever) 第5回782位 ステージクリア１ ジェシカ ルシリス リアナ 追加1 追加2 追加3 追加4 追加5 追加6 SE Collection 効果音集 オープニングムービー(Langrisser 1) オープニングムービー(Der Langrisser) サウンドトラック ラングリッサーＩ＆II プレイステーション・サウンドトラックス メサイヤゲームミュージックコレクション VOL.1 ～ラングリッサーⅠ・Ⅱ・Ⅲ～
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INDEXの貼り方 DBのTABLEにINDEXを貼るとき… どこを見ても「場合によって違います」としか書いていないので、ちょっと簡単にまとめてみる。 よく思うんだけど、「場合によって違います」ってのは正しいのは正しいけど、解答として意味が無いんだよね。最低値と平均値と最高値くらい答えられるだろ、って思う。 ２時間くらいネットサーフィンしただけの知識なので、間違ってたら指摘してください。 ①よくSELECT文を投げるテーブルに対してINDEXを貼る 当然だけど、INDEXは検索の時にするもの。 なので、SELECTされるテーブルに対してINDEXをはる。 ログ的なものなど、INSERT/UPDATEの処理が多いものだと、INDEXにもINSERT/UPDATEする必要があるので逆にパフォーマンスが落ちる。 SELECTの頻度とINSERTの頻度を比べて、貼らないものは貼らないべき。 貼るとしても、たくさんは貼らない。 なお、実行計画の順位付けから、単純に比べたら、INDEXを貼らないほうが早い！ ってケースもあるにはあるけど、そんなときはSQL側の修正をすれば、 やっぱりINDEXを貼ったほうが早い。 だから、INDEXはSELECTを使うときには貼るべき。 ②よく検索に使われるレコードに対してINDEXを貼る。 例えば、 (例1) SELECT a.id,a.name FROM test_table a WHERE a.kubun = kubun AND a.status = status AND a.name like %test% ORDER BY a.seq_no がよく使われる検索だったら、 kubun status という結合INDEXを貼る。 ③ORDER BYするレコードに対してINDEXを貼る。 例1だと、 seq_no の単独INDEXを貼る。 ORDER BY a.seq_no,a.priority とかだったら、 seq_no priority の結合INDEXを貼る。 ただし、ORDER BYする列はNOT NULLでなければならない。 なお、DISTINCTはできるだけ指定しないこと。 ④GROUP BYするレコードに対してINDEXを貼る。 SELECT place_id,sum(val) FROM tsumiki_sales GROUP BY place_id 上記なら、 place_id val の結合INDEXを貼る。 なお、できるだけHAVINGは使わず、WHERE句を使う。 ⑤COUNT,MAX,MINを使うカラムに対してINDEXを貼る。 MAXとかMINは結局ソートしてから値を出すので、INDEXを貼っておくと早くなる。 COUNTも、COUNT(列名)の指定ならINDEXを使うと早くなる。 ⑥できるだけ、種類が多いカラムから優先的にINDEXを貼る。 INDEXは「コレでコレだったら何行目！」ってのを返すわけなので… 例えば、0と1しかないところにINDEXを貼っても意味があんまり無い。 なので、PRIMARY_KEYになっているものや、複合PRIMARY_KEYになっているものだと INDEXの効果が最大限に発揮できる。 …と言っても、検索に使っていないカラムにINDEX貼っても無駄だけどね。 ⑦INDEXを貼っても意味が無いのは… LIKE検索しかしていないカラム（前文一致ならOK） NOT検索しかしていないカラム（INとかに変えてINDEXを貼ろう） IS NULL検索しかしていないカラム カラムを演算している場合（カラムじゃないほうを演算しましょう） SELECT文に全く使っていないカラム ⑧単独INDEXがいいの？結合INDEXがいいの？ 単独INDEXだけだと、例えば例１で kubun status とINDEXを貼ると、「インデックスマージ」が行われる。 余計な手順であり、時間の無駄なので、 同時に使われる場合は、できるだけ結合INDEXにすべき。 ちなみに、kubun statusでINDEXを貼っている場合、 kubunだけのINDEXも貼られていることになる。 ⑨ひとつのテーブルにどれくらいINDEX貼っていいの？ SQL文自体は参照しているだけであっても、 データのロードやインポートなどの準備過程が必ず発生するため… 6～7個以内を目安とするのが普通みたいです。 ちなみに、更新が頻繁に発生するテーブルなら、2～3個以内くらい。
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Sound Horizon/Linked Horizon 2011.01.14 7th Story Concert 「Märchen」 ～キミが今笑っている、眩いその時代に…～ 追加公演 2011.07.30 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠新潟テルサ 2011.08.06 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠愛知県芸術劇場大ホール 2011.08.07 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠愛知県芸術劇場大ホール 2011.08.11 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠神戸国際会館こくさいホール 2011.08.19 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠静岡 アクトシティ浜松 2011.09.10 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠大阪城ホール 2011.09.16 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠横浜アリーナ 2011.09.17 Sound Horizon Live Tour 2011 第一次領土復興遠征 ＠横浜アリーナ 2012.11.24 Revo Linked BRAVELY DEFAULT Concert 2013.07.13 Linked Horizon トーク＆ライブイベント「自由への進撃」 2013.07.17 Linked Horizon トーク＆ライブイベント「自由への進撃」 2013.10.26 Revo’s Halloween Party 2011.11 Haruka Shimotsuki solo live Lv.4 ～シモツキンの逆襲～ アニメイベント テニスの王子様 2011.01.22 テニプリフェスタ2011 心 ＠武道館 2011.01.23 テニプリフェスタ2011 技・体 ＠武道館 2013.04.07 越前リョーマLIVE TOUR 2013-RYOMA TAKE OFF- 2013.09.21 テニプリフェスタ2013 ヘタリア 2011.01.09 ヘタリアWorld Seriesまるかいて大感謝祭 ＠パシフィコ横浜 声優 田村ゆかり 2012.01.29 田村ゆかり LOVE♥LIVE 2012 *I Love Rabbit* 2012.10.13 田村ゆかり LOVE♥LIVE 2012 Autumn *Fall in Love* 堀江由衣 2013.03.16 堀江由衣ベストライブ～由衣と時間泥棒～ 2013.03.17 堀江由衣をめぐる冒険Ⅳ～パイレーツ・オブ・ユイ 3013～ 新谷良子 2011.10 新谷良子LIVE TOUR はっぴぃ・はっぴぃ・すまいる 11 chu→lip☆CHEERS! モーニング娘。 2011.05 モーニング娘。コンサートツアー2011春 新創世記 ファンタジーDX ～9期メンを迎えて～ 2011.09 モーニング娘。コンサートツアー2011秋 ～愛BELIEVE～ 2012.03.18 モーニング娘。コンサートツアー2012春 ～ウルトラスマート～ 2012.12.02 モーニング娘。誕生15周年記念コンサートツアー2012秋 ～カラフルキャラクター～ 2013.04.14 モーニング娘。コンサートツアー2013春～ミチシゲ☆イレブンSOUL～ 2013.10.20 モーニング娘。コンサートツアー2013秋 ～CHANCE！～ 2011.08.19 Hello! Project 誕生15周年記念ライブ 2012 夏 Ktkr/Wkwk夏のFAN祭り! LV キンキ 2012.12.23 KinKi Kids Concert Thank you for 15 years 2012-2013 2013.12.23 KinKi Kids Concert 2013-2014 「L」 その他 2013.06.23 T-SQUARE SUPER BAND CONCERT TOUR 2013 “Smile” ミュージカル 東宝ミュージカル 2011.01 ミュージカル『ゾロ』 2011.05 ミュージカル『レ・ミゼラブル』 2011.05 ミュージカル『レ・ミゼラブル』 2011.05 ミュージカル『レ・ミゼラブル』 2011.05 ミュージカル『レ・ミゼラブル』 2011.07 ミュージカル『三銃士』 2011.10 ミュージカル『ロミオ＆ジュリエット』 2012.01.08 ミュージカル『ダンス・オブ・ヴァンパイア』 2012.02.12 ミュージカル『ラ・カージュ・オ・フォール』 2012.03.04 ミュージカル『ハムレット』 2012.03.18 M.クンツェ＆S.リーヴァイの世界～2nd Season～ 2012.04.15 ミュージカル『ジキル＆ハイド』 2012.08.18 ミュージカル『エリザベート』 2012.10.28 ウィーン版ミュージカル『エリザベート』20周年記念コンサート 2012.11.04 フランス版ミュージカル『ロミオ＆ジュリエット』 2012.12.22 ミュージカル『ミス・サイゴン』 2013.03.17 ミュージカル『スリル・ミー』 2013.07.15 ウィーン・ミュージカル・コンサート2 2013.10.05 ミュージカル『レ・ミゼラブル』 2013.10.14 ミュージカル『レ・ミゼラブル』 2013.10.22 ミュージカル『ロミオ＆ジュリエット』 劇団四季 2012.09.01 劇団四季『ウィキッド』 2013.08.10 劇団四季『桃次郎の冒険』 宝塚 2011.02 宝塚 2012.09.16 宝塚 2012.11.26 宝塚『エリザベーﾄ』 アニメミュージカル 忍たま乱太郎 2011.01.22 ミュージカル「忍たま乱太郎」第２弾～予算会議でモメてます!～ ＠東京ドームシティ シアターGロッソ 2013.06.27 ミュージカル『忍たま乱太郎』第４弾 再演～最恐計画を暴きだせ！！ 美少女戦士セーラームーン 2013.09.22 ミュージカル『美少女戦士セーラームーン -La Reconquista-
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Introduction to VHDL Kluwer Academic Publishers? Derrick Hunter? T.T. Johnson? KluwerAcademicPublishers? DerrickHunter? T.T.Johnson? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-10? Subjects-Computers&Internet-ComputerScience-SystemsAnalysis&Design? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Cellular PCs/Pcn Telephone Systems An Overview of Technologies, Economics Services Apdg Pub? Lawrence Harte? ApdgPub? LawrenceHarte? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-41? Subjects-Computers&Internet-Networking-Networks,Protocols&APIs-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-Radio&Wireless? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-Radio&Wireless? Subjects-Science-General Electrical Apparatus for Use in Class I, Zone 1 Hazardous (Classified) Locations Instrument Society of America? InstrumentSocietyofAmerica? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-35 Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Electronics 3 (Checkbooks S) Heinemann Professional? S A Knight? HeinemannProfessional? SAKnight? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Electronics 2 (Checkbooks S) Heinemann Professional? S A Knight? HeinemannProfessional? SAKnight? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Image and Video Databases Restoration, Watermarking and Retrieval (Advances in Image Communication, 8) Elsevier Science Ltd? G. C. Langelaar? P. M. B. Van Roosmalen? J. Biemond? R. L. Langendijk? A. Hanjalic? ElsevierScienceLtd? G.C.Langelaar? P.M.B.VanRoosmalen? J.Biemond? R.L.Langendijk? A.Hanjalic? ジャンル別? Subjects-Computers&Internet-General? Subjects-Computers&Internet-ComputerScience-Algorithms-DigitalImageProcessing? Subjects-Engineering-ComputerTechnology-ImagingSystems? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-ComputerTechnology-ImagingSystems? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-General? Princples of Electronics Chand (S.) & Co Ltd ,India? V.K. Mehta? Chand(S.)&CoLtd,India? V.K.Mehta? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Dictionary of Electrical Engineering and Electronics German-English Verlag Alexandre Hatier? Peter-Klaus Budig? VerlagAlexandreHatier? Peter-KlausBudig? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Nonfiction-Education-Reference-Dictionaries&Thesauri-English(All)? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Reference-Dictionaries&Thesauruses-English(All)? Subjects-Science-Physics-Applied? Electronics Laboratory Primer Chand (S.) & Co Ltd ,India? S.Poorna Chandra? B. Sasikala? Chand(S.)&CoLtd,India? S.PoornaChandra? B.Sasikala? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-General Active, Hybrid, and Semi-active Structural Control A Design and Implementation Handbook John Wiley & Sons Inc? S. Y. Chu? A. M. Reinhorn? T. T. Soong? JohnWiley&SonsInc? S.Y.Chu? A.M.Reinhorn? T.T.Soong? ジャンル別? Subjects-Engineering-Civil-Structural? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Civil-Structural? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Science-General Speech Recognition over Digital Channels Robustness And Standards John Wiley & Sons Inc? Antonio Peinado? JohnWiley&SonsInc? AntonioPeinado? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Science-General RF and Microwave Transistor Oscillator Design John Wiley & Sons Inc? Andrei Grebennikov? JohnWiley&SonsInc? AndreiGrebennikov? ジャンル別? Subjects-Computers&Internet-ComputerScience-Circuitry-CircuitComponents? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-Microwaves? Subjects-Engineering-Telecommunications-Radio&Wireless? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-Microwaves? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-Radio&Wireless? Subjects-Science-General Corrosion of Reinforcement in Concrete, Monitoring, Prevention and Rehabilitation Papers from Eurocorr '97, Trondheim, Norway, 1997 (European Federation of Corrosion Publications , No 25) Maney Pub? J. Mietz? B. Elsener? R. Polder? ManeyPub? J.Mietz? B.Elsener? R.Polder? ジャンル別? Subjects-Engineering-Civil-Construction-General? Subjects-Engineering-Civil-Structural? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Home&Garden-HomeDesign-Buildings&Construction? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Civil-Construction-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Civil-Structural? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Science-General Fuzzy Clustering and Its Applications John Wiley & Sons Inc? Valente De Oliveira? JohnWiley&SonsInc? ValenteDeOliveira? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Subjects-Science-General Subjects-Science-Reference-General? Mobile Personal Content Wiley-Interscience? Juha Lehikoinen? Ilkka Salminen? Antii Aaltonen? Wiley-Interscience? JuhaLehikoinen? IlkkaSalminen? AntiiAaltonen? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Science-General Modern Antenna Handbook Wiley-Interscience? Constantine A. Balanis? Wiley-Interscience? ConstantineA.Balanis? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-General? Modern Antenna Handbook Wiley-Interscience? Constantine A. Balanis? Wiley-Interscience? ConstantineA.Balanis? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-General? Electrically Small, Superdirective, And Superconducting Antennas Wiley-Interscience? R. C. Hansen? Wiley-Interscience? R.C.Hansen? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Subjects-Science-General Ultra Wideband Antennas And Propagation for Communications, Radar And Imaging John Wiley & Sons Inc? Ben Allen? David Edwards? Anthony Brown? Wasim Malik? JohnWiley&SonsInc? BenAllen? DavidEdwards? AnthonyBrown? WasimMalik? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Nonfiction-Education-Reference-Words&Language-Communication? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Subjects-Reference-Words&Language-Communication? Subjects-Science-General Adaptive Structures Engineering Applications John Wiley & Sons Inc? Michael Friswell? David Wagg? Ian Bond? Paul Weaver? JohnWiley&SonsInc? MichaelFriswell? DavidWagg? IanBond? PaulWeaver? ジャンル別? Subjects-Engineering-Aerospace? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-General? Subjects-Engineering-MaterialsScience-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-MaterialsScience-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Aerospace? Subjects-Professional&Technical-Engineering-General Subjects-Science-General Subjects-Science-Astronomy-Aeronautics&Astronautics? Fundamentals of Electrical Engineering and Electronics Chand (S.) & Co Ltd ,India? B.L. Theraja? Chand(S.)&CoLtd,India? B.L.Theraja? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Principles of Electronics John Wiley & Sons (Asia) Pte Ltd? B.V. Rao? JohnWiley&Sons(Asia)PteLtd? B.V.Rao? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-53? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-Physics-Electromagnetism-General? Electronic Princples Har Anand Publications,India? T.R. Verma? J.D. Anand? HarAnandPublications,India? T.R.Verma? J.D.Anand? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-53? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Smart Material Systems And Mems Design And Development Methodologies John Wiley & Sons Inc? Vijay K. Varadan? K. J. Vinoy? S. Gopalakrishnan? JohnWiley&SonsInc? VijayK.Varadan? K.J.Vinoy? S.Gopalakrishnan? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-Microelectronics? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-Microelectronics? Subjects-Science-General Encyclopaedia of Nano Electronics Anmol Publications Pvt Ltd? Hugh Watson? AnmolPublicationsPvtLtd? HughWatson? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Reference? Digital Design John Wiley & Sons Inc? Frank Vahid? JohnWiley&SonsInc? FrankVahid? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Audio Bandwidth Extension Application of Psychoacoustics, Signal Processing and Loudspeaker Design John Wiley & Sons Inc? Erik Larsen? Ronald M. Aarts? JohnWiley&SonsInc? ErikLarsen? RonaldM.Aarts? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Subjects-Science-General Comprehensive Electronics Engineering Fundamentals Laxmi Publications? Monish Gupta? LaxmiPublications? MonishGupta? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Array and Phased Array Antenna Basics John Wiley & Sons Inc? Hubregt Visser? JohnWiley&SonsInc? HubregtVisser? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Optp-ireland 2005 Optoelectronics, Photonic Devices, And Optical Networks, Proceedings of SPIE 4-6 April 2005, Dublin, Ireland (Proceedings of SPIE) Society of Photo Optical? John G. McInerney? SocietyofPhotoOptical? JohnG.McInerney? ジャンル別? Subjects-Computers&Internet-ComputerScience-Circuitry-Optoelectronics? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-Optoelectronics? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-Optoelectronics? Subjects-Science-General Optical Security Systems (SPIE Conference Proceedings) Society of Photo Optical? Zbigniew JAROSZEWICZ? SocietyofPhotoOptical? ZbigniewJAROSZEWICZ? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Optics-General? ISTFA ASM International? ASMInternational? ジャンル別? Subjects-Computers&Internet-ComputerScience-Circuitry-CircuitComponents? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-MaterialsScience-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Circuits? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-MaterialsScience-General? Applied Electronics Engineering Handbook John Wiley & Sons Inc? Robert J. Herrick? JohnWiley&SonsInc? RobertJ.Herrick? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-12? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Electrical Machines and Systems (Icems'2001), the 5th International Conference on Ieee? Liaoning Sheng, China) International Conference on Electrical Machines and Systems (5th 2001 Shenyang? Ieee? LiaoningSheng,China)InternationalConferenceonElectricalMachinesandSystems(5th 2001 Shenyang? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-Machinery? Subjects-Engineering-Mechanical-General? Subjects-Engineering-Mechanical-Machinery? Subjects-Engineering-Reference? Subjects-Engineering-Telecommunications? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Industrial,Manufacturing&OperationalSystems-Machinery? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Mechanical-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Mechanical-Machinery? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Reference? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications? Subjects-Reference? Subjects-Science-General Subjects-Science-Reference-Engineering? Subjects-Science-Technology-General&Reference Electronics Prentice-Hall of India Pvt.Ltd? I.J. Nagrath? Prentice-HallofIndiaPvt.Ltd? I.J.Nagrath? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Safety Instrumented Functions (SIF)-safety Integrity Level (SIL) Evaluation Technicians Instrument Society of America? InstrumentSocietyofAmerica? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-35 Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-General ICO20 (Proceedings of SPIE) SPIE Society of Photo-Optical Instrumentation Engi? Masayoshi Esashi? Zhaoying Zhou? SPIESocietyofPhoto-OpticalInstrumentationEngi? MasayoshiEsashi? ZhaoyingZhou? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Microelectronics Design, Technology, And Packaging 2 (Proceedings of SPIE) Society of Photo Optical? Alex Hariz? SocietyofPhotoOptical? AlexHariz? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-Microelectronics? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-Microelectronics? Subjects-Science-General Micromachining Technology for Micro-optics and Nano-optics IV (Proceedings of SPIE) Society of Photo Optical? Eric G. Johnson? Gregory P. Nordin? Thomas J. Suleski? SocietyofPhotoOptical? EricG.Johnson? GregoryP.Nordin? ThomasJ.Suleski? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Semiconductors? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Semiconductors? Computer Technology for Technicians Longman? R V Watkin? Longman? RVWatkin? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Science-Physics-Applied? Computer Technology for Technicians Longman? R V Watkin? Longman? RVWatkin? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Reliability, Packaging, Testing, and Characterization of MEMS/MOEMS V (Proceedings of SPIE) SPIE Society of Photo-Optical Instrumentation Engi? Danelle M. Tanner? Rajeshuni Ramesham? SPIESocietyofPhoto-OpticalInstrumentationEngi? DanelleM.Tanner? RajeshuniRamesham? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Microfluidics Biomems and Medical Micros IV (Proceedings of SPIE) Society of Photo Optical? Ian Papautsky? SocietyofPhotoOptical? IanPapautsky? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Medicine-Specialties-Family&GeneralPractice? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Medical-Medicine-InternalMedicine-FamilyPractice? Subjects-Professional&Technical-Medical-Medicine-Reference-Instruments&Supplies? Subjects-Science-Experiments,Instruments&Measurement-Microscopes&Microsocopy? Subjects-Science-General Subjects-Science-Medicine-Specialties-Family&GeneralPractice? Modern Electronic Communication Prentice Hall College Div? Jeffrey S. Beasley? PrenticeHallCollegeDiv? JeffreyS.Beasley? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Telecommunications-General? Subjects-Science-General Electronics Prentice Hall? Allan R. Hambley? PrenticeHall? AllanR.Hambley? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-General? Subjects-Science-General Microelectronics Dictionary Longman? M Plant? Longman? MPlant? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? 1999 Computer Monitor Troubleshooting Tips Prompt Pubns? M. I. Technologies? PromptPubns? M.I.Technologies? ジャンル別? Subjects-Computers&Internet-Networking-Networks,Protocols&APIs-General? Subjects-Computers&Internet-ComputerScience? Subjects-Computers&Internet-Hardware-Peripherals? Subjects-Computers&Internet-General? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? MEMS / MOEMS Components and Their Applications III (Proceedings of SPIE) SPIE Society of Photo-Optical Instrumentation Engi? Scot S. Olivier? Srinivas A. Tadigadapa? Albert K. Henning? SPIESocietyofPhoto-OpticalInstrumentationEngi? ScotS.Olivier? SrinivasA.Tadigadapa? AlbertK.Henning? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Electronic Fault Diagnosis Longman? George Loveday? Longman? GeorgeLoveday? ジャンル別? Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Professional&Technical-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Safety Instrumented Functions (SIF)-safety Integrity Level (SIL) Evaluation Techniques Instrument Society of America? InstrumentSocietyofAmerica? ジャンル別? Substores-UnknownASINs-35 Subjects-Engineering-Electrical&Electronics-Electronics-General? Subjects-Engineering-General? 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Emil chronicle online emu エミルクロニクルオンラインのエミュ鯖です。 現在身内にてテスト運営中。 不具合・未実装等、多数残っていますがご了承下さい。 不明者 送信日時：2008/10/31 08 26 17 名前：ア○○○○ メール宛先不明ですよー ECOにエミュは必要ですか？ 着せ替えできればなんでもよくね？ - 名無しさん 2008-10-30 03 17 09 上に同意。狩りとかできなくてもいいっていうか、エミュ鯖で廃狩りとかしたくない - 名無しさん 2008-10-30 08 29 51 暇つぶし用程度に狩りとかクエも欲しい - ななし 2008-10-30 18 28 55 本家に無いミニゲームみたいのが欲しい - 名無しさん 2008-10-30 21 06 45 名前
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Vehicle M10 Tank Destroyer Contents 1 M10 Tank Destroyer Veterancy 2 Tactics 3 History 4 Built/Called In From 4.1 Tank Depot 4.2 Off-Map Combat Group 5 Company Abilities 5.1 Field Repairs 5.2 Allied War Machine 6 Vehicle Abilities 6.1 Vehicle Cover 7 Vehicle Weapons 7.1 3in Tank Destroyer M10 Tank Destroyer Health 400 Max Speed 6.8 Sight 35 Cost 30055 Acceleration 1.7 Detection 0/0 Time 45 Deceleration 3.8 Hotkey M Population 6 Rotation 38 Target Type armour_m10 Upkeep 10.368 Crush Human true Critical Type armour Crush Mode crush_medium Rear Damage Enabled true M10 Tank Destroyer Veterancy [Expand][Hide] Maximum Speed 1.25 8 Vet-Exp Penetration 1.5 16 Vet-Exp Damage 1.25 32 Vet-Exp Tactics A properly microed M10 can use its medium crush to kill many Axis infantry. Use reverse orders to maximize the Carmageddon experience. Use an M10 s speed to flank slower rotating Axis Heavy Tanks. History The 3 inch Gun Motor Carriage M10, was a United States TD (Tank Destroyer) of the Second World War. US troops borrowed the nickname the Canadians had given the vehicle, Wolverine, and the name became officially used by the British for their lend-lease 3 inch GMC M10s. Once it became apparent that American medium tanks were no match for the German heavies, and that it would be quite some time before an adequate US heavy tank could be developed, the interim solution was to rely on the cheaper, less technically advanced tank destroyer. Though equipped with turrets (unlike conventional tank destroyer doctrine of the day), the typical American design was more heavily gunned, but more lightly armored, and thus more maneuverable, than a true tank. The idea was to use speed and agility as a defense, rather than thick armor, to bring a powerful self-propelled gun into action against enemy tanks. Tank destroyer platoons were a combination of recon troops riding in jeeps or M20 utility vehicles, and the M10 tank destroyers which waited in hidden positions until the recon element discovered enemy tanks. This practice was dubbed Seek, Strike, and Destroy, but in practice it didn t fit with the rest of the US Army s doctrine, and so the M10 often was thrown into situations more suited for a proper tank. The 3 inch Gun Motor Carriage T35 was the prototype of the M10. It had a 3 inch gun (76.2 mm) in a new sloped, circular, open topped turret, that was developed from the turret used on the Heavy Tank T1/M6, it was mounted on an early production Medium Tank M4A2 hull. The design may have been motivated by the success of the Soviet T-34, which it resembles in many ways including the similar armor thickness and slope and the choice of main gun.[citation needed] The T35 was improved upon; it was given a sloped hull built on the M4A2 chassis, and had its circular turret replaced with a pentagonal turret, this model was designated the 3 inch Gun Motor Carriage T35E1. In June 1942 the 3 inch GMG T35E1 had its designation changed to become the 3 in Gun Motor Carriage M10, and ordered into full production. A British variant, designated Achilles , was developed to mount the successful 17-pounder anti-tank gun in a modified turret. It was used by the British, Canadian and Polish armies in Italy and north-west Europe. Built/Called In From Tank Depot [Expand][Hide] Health 775 Target Type building Cost 35090 Critical Type building Time 165 Hotkey T Effects Primary Tank Production Structure. Deploys M10 s, M4 Shermans as well as Sherman Crocodiles. Also contains upgrades for the M4 Sherman. ESee Structure Tank Depot for details. OR Off-Map Combat Group [Expand][Hide] Cost 800 Activation targeted Duration 0 Target tp_any Recharge 40 Hotkey Effects A small Reinforcement Division is available. ESee Ability Off-Map Combat Group for details. Company Abilities Field Repairs [Expand][Hide] Cost 150 Activation timed Duration 20 Target tp_any Recharge 45 Hotkey Effects Crews will Repair their own Vehicles automatically. ESee Ability Field Repairs for details. Allied War Machine [Expand][Hide] Cost 200 Activation timed Duration 30 Target tp_any Recharge 90 Hotkey Effects Replaces up to 2 destroyed Allied tanks with a new Tank for a period of time. ESee Ability Allied War Machine for details. Vehicle Abilities Vehicle Cover [Expand][Hide] Cost Activation always_on Duration _ Target tp_any Recharge 0 Hotkey Effects $0 no key ESee Ability Vehicle Cover for details. Vehicle Weapons 3in Tank Destroyer [Expand][Hide] Weapon 3in Tank Destroyer See Weapon 3in Tank Destroyer for details. Retrieved from http //www.coh-stats.com/Vehicle M10_Tank_Destroyer
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質問対策 だいたいこんなもの？ こんなかんじ。 こんなかんじ。 ＦＬＩＭに最低限必要なこととは？ １．８０ＭＨｚのパルスレーザー ２．高感度の光電子増倍管 ３．ナノ秒オーダーで蛍光寿命を取得するハードウェア 脂質とプローブの関係はどうなっているのか？ 普通培養細胞は、１ｐｌくらいだと考えられています。 スパインの中は０．１ｆｌから０．０１ｆｌくらい 大体、１００倍くらいだと考えられます。 大体、ＤＡＧは、１ｆモルです。一細胞に。 だから、１０あぷとモルくらいある。（この計算はおかしい。神経の場合、スパインは特別だと考えられる） ＰＩＰ３の場合は、その１００倍くらい少ないから。１００ゼプト盛るくらいあります。これが、刺激によって１０倍くらいに変わるといわれています。 脂質プローブと脂質の結合能は、かなり高いですから、始めから結合していると考えられます。ここで、刺激が加わると、破壊分析の結果などを参考にしますと１０倍から最大で５０倍くらいの脂質ができます。これに、プローブが反応して応答するということになります。これは、プローブ全部を応答させるための量く シグナル伝達に関わるタンパク質は、タンパク質は、数十個あると言われている。よって、それに応答するPIP3も同様にそのレベルあるのではないかと推測します。プローブ分子は膜タンパク質で、蛍光を見ればわかるとおり、極めて量は少ないです。タンパク質の発現量は10-6Mくらいですから、スパインの容量が0.01flくらいだとすると、大体数十個くらいあると考えられます。よって、PIP3、プローブが大体数十個くらいずつあると想定してもらえれば大丈夫です。普通のPMTではなく、Gasp detectorを用いて観測しております。 1. In this presentation, you don t mention SHIP protein. How do you think SHIP protein is involved in this pathway? Thank you very much for good question. Exactly, SHIP is the protein that degrades PIP3 to PI(3,4)P2. I did not examine the effect of SHIP on spinule formation. Some paper shows that SHIP is not expressed in HP. Anyway it is very interesting to know the effect of SHIP on spinule formation. 1.0 How did you analyze spinule formation? It is pretty difficult that as you know spinule is very fine structure. So it is pretty difficult to observed. In our study we used the hamahoto H7422 Gasp detector. Spinules that protruded from the spine head were counted. Each synaptic spinule, regardness of its size and orientation, was scored as in previous studies (Tao-Cheng et al., 2009) And we did analyze the circularity. The effect of PTEN inhibitor, which increses PIP3, reduced the circularity. In the case of PI3K inhibitor, which decreases PIP3, there was the tendency that circularity increases but no significant difference. 1. 1. PIP3 or PIP2? very good question. This study is in the middle of revise. Reviewer pointed out about this point. I am looking for the protein of downstream of PIP3 such as Akt protein. And basically PIP2 is 100 times more than PIP3. even though PIP3 increase or decreases, PIP2 level is not reflected. So I think that PIP3 is the factor to regulate spinule formation. 1. 2. The relationship between schizophronia and PIP3 Inositol metabolism is deeply related to the depression and bipolar disorder. Because old days drug lithium is well known to work this pathway. currently it seems that lithium effects the GSK3beta. And PTEN mutant causes coden disease, which is accompanied by sometime mental reterdation. So PIP3 and inositol metabolism is related to the disease like these. But I think there is mainly two cause inositol metabolism regulates such a diseases. One is that PIP3 regulates the neuronal development in develop brains. The other is synapse function after neuron grown up. In the present study, I examined the effect of PIP3 on spine morphology. In near future, I want to examine the effect of PIP3 on neuron development. In some part, Dr. sheng reveal that PIP3 regulates the dendritic arborization though. 1.3 How about the mobility of PIP3 側方拡散lateral diffusion is roughly 1 microm/sec. But Dr. Kusumi shows that there is some barria mechanism which prevent the lateral diffusion of lipids. The molecules is surrounded by the fenses the size is 30 to 200 nm. So we cannot say that PIP3 is easily do the lateral diffusion. 1.4 PIP3 and raft Basically PIP3 fatty acid composition is steroyl and arachidonyl. 1.5 Did you try RNAi for PI3K and PTEN I tried PTEN RNAi. But I don t analyzed yet. 1.6 Did you check the decrease in PIP3 in the presence of PI3K inihibitor? Yes, I did it. I observed PIP3 reduction and increase in the presense of PI3K and PTEN inhibitor respectively in this figure. In the presence of PI3K inhibitor, PIP3 decrease more in spine than dendritic shaft. In the presence of PTEN inihibitor, PIP3 increase more in dendritic shaft than spines. Previously several paper shows that PTEN is localize in the dendritic shaft. Also some paper showed that PI3K is localized in spines and dendrites, but PI3K directly binds to AMPA receptors, leadting to PI3K activation. This data answers that why PIP3 is accumulated in the spines. 2. In the middle of glutamate uncaging, is PTEN related to this decrease? At first, I expect that PIP3 decrease during glutamate ungaging is due to PTEN. But I examined the effect of PTEN inhibitor on PIP3 decrease during glutatate uncaging. There is no obvious difference with or without PTEN inhibitor about PIP3 decrease. So I think this decrease of PIP3 is mainly due to menbrane insertion. 3. PTEN is dual phosphatase? Did you remove the possiblility PTEN phosphatase activity works in this pathway? Exactly PTEN has dual phosphatase activities. burabura. 4. PIP3 is involved in the functional plasticity? and structural plasticity? As I showd in introduction, there is no doubt that PIP3 regulates functional plasticity. 5. Does PIP3 regulate spinule length? Actually PIP3 regulates the number of spinule. But the length of spinule is not regulated by PIP3. 6. Explain the FLIM more. 7. What is the strength of FLIM compared to FRET? Previously I developed the ratiometric FRET probes including PIP3 and DAG probes. In the case of ratiometric-based FRET probe, in the thick tissues like hippocampal slice, wave-dependent fluorescence absorabance is gonna happen. We cannot measure appropriate FRET efficiecy. So I newly developed the florescence lifetime-based probe. Fluorescence lifetime never change even though thick tissues. That is the strength of FLIM. 8. PI3K works in the middle of glutamate uncaging? I did the experiment to see the effect of PI3K inhibitor on PIP3 concentration during glutamate uncaging. But there is no significant difference between with or without PI3K inhibitor. This means that enzymatic induced PIP3 is extremely little compared to dilution of PIP3 which is caused by membrane insertion. But if we want to observe more detail PIP3 dynamics which is caused by the PI3K or PTEN during glutamate uncaging, I plan to do this experiment as follows. At first I make the situation that spine size doesn t change even during glutamate uncaging using cytokarasin and catrunculin, which is inhibitor for actin polymerization. In this situation I am gonna measure the PIP3 increase or decerase. So I can observe real PIP3 change not induced by membrane insertion. 9. What is the down stream pathway of spinule formation? 10. What is the most difficult point for this work? How did you take over this problem? 11. What number of PIP3 is there in spine? Rough caluculation is 10-100 number of PIP3. How about the number and length of spinule ? raft and PIP3. my probe is subjected with palmitoyl and farnesyl modification. Recently raft proteins clustering regulate the localization of N-Ras. At least I get the response of FLIMPA3 in culture and neurons. The important proteins including PI3K is localized in raft. So PIP3 also localized in raft. But it is very interesting to discriminate the PIP3 production or reduction in raft or non-raft. 神経細胞の樹状突起には約1万個のシナプス結合があります。人が記憶する前と後で、脳の中で何かが変わっているはずです。実際、シナプスで電気の通り方などが変化することから、この一つ一つのシナプスは記憶の最小素子だと考えられています。故に、個々のシナプスの特徴を知ることは、記憶のメカニズムを探る上でとても重要です。個々のシナプスは、入力をうける神経細胞から別々に入力を受けるので、独立に働いていると考えられる一方、クロストークという減少もあります。これは、一つのシナプスに入力が起きたときに、隣接するシナプスに影響を及ぼし、隣接するシナプスで入力を受けやするするということであります。 スパインがクロストークすることはどのような意義があるのでしょうか？りんごというものを覚えたとしましょう。そのときにあるシナプスが活性化し、その付近のシナプスとクロストークします。そのときに、りんごの性質、あかい、おいしいなどの情報が近くに入力しやすくなれば、今度思い出すときに、効率がよいと考えられる。シナプス間のクロストークは、このような思考の分子レベルでのモデルとなるのではないか？と考えております。 クロストークを引き起こす因子として、従来からいろいろな因子が報告されてきました。一酸化窒素、アラキドノイルグリセロールなどの因子は、細胞膜を超えて、隣のシナプスのシナプス前膜に作用するなどの報告がありました。２００７年にラスたんぱく質が樹状突起を通って、隣のシナプスに作用することが報告されました。私は、このシナプス間のクロストークに関わる因子の一つとして、脂質シグナルがあるのではないかと考えました。脂質シグナルは、シナプス前膜からグルタミン酸が放出されるとシナプス後膜のグルタミン酸受容体が活性化し、ＰＩＰ２からホスホリパーゼＣによって、ＤＡＧ，ＰＩ３ＫによってＰＩＰ３が産生されます。ＤＡＧは、神経細胞の分化などに関わるシグナル、ＰＩＰ３は、アポトーシスに関わるシグナルを制御することが知られています。 脂質シグナルだと考える根拠は、脂質シグナルは、ラスたんぱく質の上流に位置すること、特にＰＩＰ３は、グルタミン酸などの刺激入力を受けた後、分解されずに数時間持続することが知られ、１秒間に０．５マイクロメートル側方拡散され、隣接するシナプスに到着することができるからです。この結果、この脂質シグナルが、隣接するシナプスに移動し、隣接するシナプスに入力を受けやすくなるのではないかと考えました。 では、どうやってこの脂質シグナルを測るかですが、従来までの脂質シグナルの測定法は、破壊分析に頼っていたために、一個一個のシナプスの個性を失っていました。そこで、生きた神経細胞で見るために、私が現在までに開発したＦＲＥＴプローブ分子を用いようと考えております。このプローブの特徴は、２つあります。１つは、脂質結合ドメインを変えることによって、様々な脂質を見ることができること。従来までに、ＤＡＧおよびＰＩＰ３のプローブを作ってきました。２つ目は膜に局在していることです。従来までに、脂質を見るためのプローブ分子として、GFPと脂質結合たんぱく質の融合プローブがよく使用されている。脂質が細胞膜で増加した際、プローブ分子が膜に移行することによって増加を確認できる。しかしながら、スパインおよび樹状突起は細胞体とつながっており、脂質プローブがスパインまたは樹状突起の膜に移動した際、細胞体にあるプローブがスパインに流れ込み、バックグランドのノイズとなる。申請者のプローブ分子は、膜に局在しているために、バックグランドがないため、スパインおよび樹状突起での脂質の動態を見るために優れている。これは、脂質シグナルをシナプスにおいて観察することができる能力を有しております。 実験においては、この作製した脂質ＦＲＥＴプローブを海馬スライスに遺伝子銃によってトランスフェクションします。次に、詳細は省きますが、自作の２光子顕微鏡を用いて、神経細胞を観察します。図のように樹状突起およびスパインが観察されます。 次に、プローブを発現した神経細胞のひとつのシナプスを刺激します。顕微鏡下で、神経細胞はこのように観察されます。２００４年にひとつのシナプスを刺激する方法が開発されました。まず、グルタミン酸前駆体をインキュベートします。一つのシナプスの近傍に光刺激を行うと、この限られた範囲でグルタミン酸が産生され、シナプスが刺激されます。これによって、脂質のシグナルがどのように起きるのかを観察します。また、図を観察すると刺激を受けたスパインだけ大きさが大きくなっていることがわかります。シナプスはある一定以上の強さの入力を受けることで、このように大きさを変えます。これは、このシナプスがこの入力を記憶したということを示しています。申請先研究室では、このシステムをいち早く取り入れ、８０％以上の確率でシナプスサイズを変えることが可能であります。 そこで、一年目では、2光子顕微鏡のセットアップを行う。それと同時に、ＰＩＰ２，ＤＡＧ，ＰＩＰ３のプローブ分子をＦＬＩＭプローブに変える。 ２年目では、一つのシナプスを刺激し、脂質シグナルがどの程度、どのくらい樹状突起まで伸びていくのかなどの、基本的な情報を得ます。時間的には、グルタミン酸産生に伴い脂質シグナルが活性化しＰＩＰ２は、基質であるために、減少し、ＤＡＧおよびＰＩＰ３は増加すると考えられます。しかしながら、ＤＡＧは破壊分析の結果から一過性、ＰＩＰ３は、持続すると期待できます。 ２年目は、脂質シグナルが届くシナプスと届かないシナプスに刺激を与え、光刺激がどの程度の刺激の強さで、スパインの大きさが変わるかを調べます。 脂質シグナルが届く範囲のスパインは、より弱い光刺激で大きくなるのではないかと期待します。 次に、脂質の移動を止めるために、セプチンたんぱく質を強制発現します。発現します。このたんぱく質は、図のようにスパインネックに発現します。緑がＧＦＰセプチン、赤は神経細胞の形状のマーカーです。セプチンは３ｎｍほどのたんぱく質でこれらがオリゴマーを形成し、スパイン脂質の移動を阻害します。この状態で、一つのシナプスを刺激します。すると脂質の移動は阻害されますから、隣接するスパインの大きさの変わり方は、遠くのシナプスと変わらないのではないかと推測できます。 この実験によって、脂質シグナルがシナプスのクロストークに必要であるかを検証します。 本研究では、 申請者が現在までに培ってきた脂質の知識 および蛍光プローブ分子を現所属研究室に導入する 現研究室にある２光子顕微鏡グルタミン酸光分解システムを用いる。 スパインにグルタミン酸刺激を与えたときに、 脂質分子のスパイン内および樹状突起上での広がりを観察する 脂質分子の移動を阻害することで、脂質シグナルが、隣接するシナプスにどのように影響を及ぼすのかを探っていく ＭＩＴ時代には何をやってきたのですか？ クロストークをとめたら連想がとまった。 脂質シグナルをとめたら連想することができなくなった。 個々のシナプスで引き起こされるシグナルは、シナプス内で留まることも予想されるが、近年、一つのスパインの変化が、隣接するスパインに影響を及ぼすことが報告されている 従来までのシナプスでのシグナル伝達を調べる方法としては、シグナル伝達の阻害剤と電気生理的手法を用いた結果が主であり、一万個存在するシナプスの総和から得られた情報である。 How much does enlargement of spine happen? How much does lipid second messenger is there? Is it right to tell lipid signaling as controller of signal? What is the function of septin? Septin is discovered in1971 in budding yeast mutants defective in cell-cycle progression. If you overexpress the septin, not only lipids but also the protein, which localize in membrane, is stopped by the septin, right? I need to prepare the septin, which have mutant ATP binding site or mutant enzyme activity delation mutant. You should learn the mechanism the pathway until producing lipid second messenger. ラフトによって、もっと上流のたんぱく質は動くことがないのではないか？ Ｇたんぱく質はそるブルだから大丈夫。しかし、Ｇｂｒは膜局在型。代謝型グルタミン酸受容体はどのＧたんぱく質を活性化するのか？また、ＰＬＣデルタ、ＰＬＣβは泳ぐが大丈夫か？ 脂質の組成がミックスしないようにたんぱく質がバリアを作っているということは結構ある。らてらるとばそらてらる。 でんどらいとにのみ発現しているようなたんぱく質はないだろうか？ What size is lipid? ゴーシュ型でC-C 1.513; C-H 1.112 Å アンチ型でC-C 1.511C-H 1.112 Å 大体DAGは5Å, 10Å PIP3は10Å, 10Å PTEN, DGKをノックアウトしたらどのくらいまで伸びるのか？ どれくらい脂質は産生するの？ 本当に脂質はシグナルの司令塔なの？ 西塚先生を出す。 デイビッドホロビンを出す。 脂質って細胞膜からどれくらい出ているのか？ＰＩＰ３だったら１５ｎｍ以上は出ていると思う。 もし、始めから脂質の移動が阻害されていたらどうする？ 確かに、CaMkIIはスパインでのみ活性化されることが知られている。 しかし、Rasは結構長く伸びることが知られている。 脂質の移動を阻害するものの有力なものとして、セプチンがあげられるのですが、エンドジーニアスなセプチンもあります。ただ、結構、すべてのスパインネックに存在しているわけではなく、もしかしたら、脂質の移動を変えるような働きをしている可能性があります。クロストークに選択性があるということでとても面白いということになります。 脂質シグナルをスパインで見ることの重要性。 何故、スパインが記憶の最小素子となるのか？ 何故あなたは脂質シグナリングを選んだのか？ 1．脂質シグナルは移動することができるシグナルの最上流である。 2．脂質シグナルの特にＰＩＰ３シグナリングはしばらくの間持続する。 ＰＫＣの局在を見てみるとデンドライトでも起きている。やっぱり脂質は移動していると考えられる。 実は、かれるによって、らすシグナルが閾値の上昇に必要だということがわかっている。しかしながら、何故ラスなのか？実は、ラスはＰＩＰ３の下流なんですよね。 PTENの局在。 DGKの局在。DGKはカルシウムによって活性化されるが、神経細胞でのカルシウムの上昇は瞬時である。 これによって、あるシグナルに反応しやすくなるようになり、ある反応に応答するシナプスクラスターができるのではないだろうか。 シナプスのクロストークに脂質シグナリングが関係していなかったら？ 脂質修飾のメカニズムについて。 ＰＩＰ２の局在は？下の論文にあるように恐らく均一に存在する。 しかし、結局のところ活性化されたグルタミン酸受容体がどこにあるかが重要でさらに、活性化したＰＩ３ＫとＰＬＣがどこにあるかによる。 Neuroscience Letters 423 (2007) 158–161 もしかするとＰＬＣやＰＩ３Ｋがデンドライトまで泳いでいって、ＰＩＰ２を代謝することはないのか？ 恐らくないと思う。その根拠は、代謝型グルタミン酸によって活性化されるＰＩ３Ｋはｐ１１０ｒだと考えられます。 このたんぱく質は、脂質修飾を受けているたんぱく質とコンプレックスを作っている。 もしかしたら他の脂質修飾されていないようなたんぱく質がＰＩＰ３を作る可能性があるかもしれないよ。 そしたら、それは、わかりません。ただ、ここで重要なのは、ＰＩＰ３ができて、それが樹状突起を移っていくことが観察できればいいのだと考えております。 ＰＩ３ｋは１，２，３型が存在する。そのうちＰＩＰ２を基質とするものは、Ｉ型だけである。一般的なＩ型のＡ型は、チロシンリン酸型受容体によって、活性化される。一方、Ｉ型のＢ型は、ｐ１１０γであり、これは、Ｇたんぱく質共役型受容体によって活性化される。Ｂｒとアダプターたんぱく質のｐ１０１と複合体を形成する。このため、かなり移動度が遅いと考えられる。よって、ＰＩＰ３のような低分子の方がかなり早く動けるのではないかと考えております。 よって、ＰＩＰ３の量は、ＰＴＥＮとＰＩ３Ｋのバランスで決まっている。しかし、 ＰＩＰ３を作り出す刺激は、グルタミン酸受容体だけなの？ いえ、恐らく他にもあるとかんがえられます。しかしながら、今回絞っているのはグルタミン酸受容体だけです。 ＤＧＫはどこにいるの？細胞質中にいますが、ＤＧＫは、９つのアイソフォームがあって、α、βは、ＰＳＤ結合ドメインを持っていないが、γ、ζはもっている。基本的に、デンドライトシナプスにいるが、後者は、ＰＳＤに濃縮されている可能性もある。 別にあなたのプローブじゃなくてもサイトゾルプローブで赤と緑比較してできるんじゃないの？ 実は、それでは難しいです。というのは、仮に、フレットプローブと膜局在プローブが培養細胞などで１００％応答した場合どちらも、最高の状態となります。しかし、神経細胞においては、デンドライトと繋がっていますから、さらに、プローブが入ってしまうわけです。すると、膜局在方はこの赤と緑がバックグランドとなって、感度が小さくなってしまうということがあげられます。よって、ＦＲＥＴプローブの方が応答はよいであろうと考えら得ます。 mGluRによって活性化されるPI3Kとして、IB型が挙げられる。これは、Ｇｂｒによって活性化される。 ちなみに、NMDA依存的にＰＩＰ２が減少する系も存在する。これには、２つの可能性が挙げられる。ＰＬＣが泳いでいった。もしくは、樹上突起にも受容体が多少なりとも存在し、それが活性化した。しかし、今調べたいのは、スパインから産生された脂質分子であるから系が全く違うと考えられる。 ＰＩＰ３は、様々な方法で産生されると考えられる。スパインにはチロシンキナーゼ受容体EPH受容体なども存在するだろう。だから、ＰＩＰ３が産生されるメカニズムはたくさんあると考えられる。しかしながら、今回はグルタミン酸受容体を考えているからそれによって活性化されるのは、代謝型グルタミン酸受容体だと考えられる。 もしかすると、ｂｒが移動するかもしれない。しかしながら、脂質とＧたんぱく質どっちが移動が早いかというと、ｇｒの方が大きいから移動しづらいと考えられる。 Rasの活性化は、11microm//4 minである。とても遅い。結局、上流のシグナルがどうなっているかについての情報は何も与えないことになる。 クロストークを行うと何がいいのか？ スパインネックが見えないんだけれどどういうこと？本当にくっついているの？ 何分後に刺激をするの？ どんな点が困難だと考えられるのか？ 逆に、スパインで制限されたらどうするの？ 答。もちろん計画を立てるときには一番面白い作業仮説をたてるわけであります。それはそれで面白いと考えられる。その一つとしてセプチンが上げられます。 普段から脂質はセプチンによって抑えられているんじゃないの？ セプチンは、細胞質のたんぱく質の拡散も防ぐんじゃないの？ それは、ＧＦＰを発現させてホトブリーチすればよい。 それを調べるためには、セプチンＲＦＰを発現させて本当にセプチンが阻害するかを調べればよい。 スパインの大きさってどれくらい？ シナプスのクロストークにプラスマイナスはあるのか？ タイトルはゴシックにする。 申請者の利点はちょっと変えるべき。 何故ＦＲＥＴを使うか？理由を述べる、 脂質シグナルをわからせる １０出たものが拡散してしまうと３になってしまう。それでよいのか？ セプチンの情報 あるセプチンは、ＰＩＰ２などとくっついて膜のbracingを起こす。Septin-mediated uniform bracing of phospholipid membranes. Tanaka-Takiguchi Y, Kinoshita M, Takiguchi K. Curr Biol. 2009 Jan 27;19(2) 140-5. ＤｉＩは分裂溝を通る。 ただ、Ｄｉｌは細胞膜の表面に入ることから表側である可能性が高い。 細胞膜の成分をミックスしないで、そのまま分けるという役割を持っているたんぱく質の一つにセプチンというたんぱく質があります。セプチンは、主に細胞分裂の際に分裂溝にセプチンリングを形成し、細胞分裂に必要なたんぱく質です。また、細胞膜上の成分をミックスしないようにしているからです。 ですので、 スパインのコンパートメントについて カルシウムは、シナプスで制限される。 ＣａＭＫＩＩも同様に制限される。 しかしながら、Ｒａｓたんぱく質は制限されずに、クロストークに必要である、ただ、ラスたんぱく質は、カルシウムシグナリングによって活性化される。ＬＹ PTENの局在について 基本的に、PTEN is preferentially expressed in neurons and is especially evident in Purkinje neurons, olfactory mitral neurons, and large pyramidal neurons. To analyze the function of PTEN in neuronal differentiation シングルセルでは、核と細胞質中に存在することがわかっている。 １．神経細胞には、樹状突起上に約1万個のスパインがあります。人が記憶する前と後で、脳の中で何かが変わっているはずです。実際、このスパインは大きさをダイナミックに変えることから、一つ一つのスパインは記憶の最小単位だと考えられています。故に、個々のシナプスの特徴を知ることは、記憶のメカニズムを探る上でとても重要です。 ２．神経細胞において、脂質シグナルは、記憶のモデルとなるシナプス可塑性と呼ばれる現象に必須であります。脂質シグナルは、シナプス前膜からグルタミン酸が放出されるとシナプス後膜のグルタミン酸受容体が活性化し、ホスファチジルイノシトール４，５２リン酸、（ＰＩＰ２）から（ジアシルグリセロール）ＤＡＧ，ホスファチジルイノシトール３，４，５３リン酸（ＰＩＰ３）が産生されます。これらの脂質は、下流のたんぱく質を制御して、シナプス可塑性を引き起こします。 従来までの脂質の測定法は、破壊分析に頼っていたために、一個一個のシナプスの個性を失っていました。そこで、目的は、脂質シグナルを一つ一つのスパインで観察するということです。 ３．申請者は、現在までに、蛍光共鳴移動ＦＲＥＴプローブ分子を開発しました。CFP, YFP, 脂質結合ドメインをαへリックスで連結します。プローブを膜局在シグナルで細胞膜に連結します。脂質が増えると脂質結合ドメインが結合し、グリシングリシンを中心にプローブが動き、ＣＦＰとＹＦＰが近づきＦＲＥＴが起きます。ＣＦＰとＹＦＰの蛍光強度比から脂質の量を測定しました。培養細胞での脂質のそれぞれの膜での脂質の動態を明らかにしてくることによって、高い評価を得てきました。 ４本研究では、直径１μｍほどの微小空間での脂質の動態を調べることにチャレンジしてみようと考えております。直径１μｍほどの微小空間においては、現在私の用いている蛍光強度比タイプのＦＲＥＴプローブでは、ＹＦＰの光分解が激しく、蛍光強度比が一定しないという短所があります。そこで、蛍光寿命を測るためのプローブ分子に改良を行います。従来のプローブのＣＦＰをＧＦＰにＹＦＰを蛍光を発しないＹＦＰに変えます。蛍光寿命ＦＲＥＴプローブの特徴は、ＧＦＰの蛍光寿命で測定するために、ＧＦＰが光分解したとしても、ただ、蛍光強度がさがるだけで、蛍光寿命は変化しません。図のようにＦＲＥＴが起きたときは蛍光寿命を表す直線の傾きが小さくなります。よって、微小空間でも精度の高いデータを取ることが可能となります。このＦＬＩＭを導入している研究施設は、世界でも３番目、日本ではうちが始めてです。 ５．実験においては、この作製したFLIMプローブを海馬スライスに遺伝子銃によってトランスフェクションします。次に、詳細は省きますが、自作の２光子顕微鏡を用いて、神経細胞を観察します。 ６．次に、プローブを発現した神経細胞の一つ一つのシナプスを刺激します。２００４年に開発された、グルタミン酸アンケイジング法を用います。まず、グルタミン酸前駆体をインキュベートします。一つのシナプスの近傍に光刺激を行うと、この限られた範囲でグルタミン酸が産生され、シナプスが刺激されます。図を観察すると０分で刺激を受けた赤点のスパインが、大きくなっていることがわかります。シナプスはある一定以上の強さの入力を受けることで、このように大きさを変えます。これは、このシナプスがこの入力を記憶したということを示しています。申請先研究室では、このシステムをいち早く取り入れ、８０％以上の確率でシナプスサイズを変えることが可能であります。本研究では、スパインの大きさを変えた際に脂質シグナルがどのように変化するのかを追っていきます。 ７．一年目では、2光子顕微鏡のセットアップを行う。それと同時に、ＰＩＰ２，ＤＡＧ，ＰＩＰ３のプローブ分子をＦＬＩＭプローブに変える。このプローブの特徴は、脂質結合ドメインを変えることによって、様々な脂質を見ることができることです。ＤＡＧのためにＰＫＣＣ１Ｂドメイン、ＰＩＰ３のために、ＧＲＰ１のＰＨドメイン、ＰＩＰ２のためにＰＬＣデルタのＰＨドメインを結合してプローブを作製します。 ２年目では、プローブ分子を発現させます。このプローブは、スパイン、樹状突起の細胞膜に局在します。グルタミン酸産生に伴い、基質であるＰＩＰ２は減少し、ＤＡＧおよびＰＩＰ３は増加すると考えられます。しかしながら、ＤＡＧは破壊分析の結果から一過性、ＰＩＰ３は、持続すると期待できます。よって、空間的には、ＰＩＰ３が樹状突起を移動していくのではないか？と推測します。 ８．３年目は、樹状突起を進展する脂質シグナルが神経細胞の機能にどのように関わっているかを調べようと思っています。脂質シグナルは、隣接するスパインにも及ぶと考えられますから、何か、隣接するシナプスに影響を与えるのではないかと考えられシナプス間のクロストークなどを調べることがきるのではないかと考えます。例えば、近いスパインでは、遠いスパインに比べて、シナプス構造可塑性を引き起こすための、刺激の閾値が下がると期待できます。この際、樹状突起上に脂質の移動を阻害するようなたんぱく質を仕込むことで本当に脂質が関与しているかを調べようと考えております。 ９．この研究において期待できること 現在、シナプスの入力へのパターンはわかっていません。クロストークが起きれば、Ａいう入力やＢという入力に対して、あるシナプスのクラスターができると考えられます。２００７年にやっと、ラスたんぱく質のシグナリングがシナプス間のクロストークに関係することがわかるようになってきました。しかし、まだあまりにもわかっていることが少なすぎます。私の脂質の動態を明らかにすることで、脂質シグナルとシナプス間のクロストークの関係を明らかにし、記憶の基盤となる神経回路のパターンの解明を行う。 １０． ＰＩＰ３シグナリングは、１時間以上も続いているということ。これは、高頻度の電気刺激をおこなっってシナプス可塑性を誘導したときに、ＰＩＰ３産生酵素ＰＩ３Ｋの阻害剤であるＬＹ２９を加えたときに、シナプス可塑性が阻害されるということからわかります。よって、脂質の速報拡散は、０．５μｍ・秒なので、十分に樹状突起を移動することができるということ。ラスたんぱく質のシグナルが樹状突起を介して隣のシナプスに移動し、スパインのシナプス可塑性の閾値を下げるということは報告されています。もちろん、脂質シグナルは、ラスたんぱく質の上流に位置しているわけですから、脂質シグナルがどのようにラスたんぱく質を制御しているかを調べることは興味深いと考えられます。 もう少し、クロストークの背景を教えてください。 ＮＯやエンカンナビノイドなどについても含めて。 ＮＯやエンカンナビノイドのクロストークは、ＮＯやエンカンナビノイドが膜を超えることができて、これがシナプス前膜に作用して、隣接するシナプスへ影響を与えるというものであります。しかし、これらの研究は、専ら、電気生理学で行われており、本当に、隣接するスパインでのクロストークを見ているかについては全く、わかっておりません。 このように、シナプス前膜に作用するわけですが、シナプスのクロストークは何も前膜だけでなくて、シナプス後膜スパインで起きていてもよいわけです。近年、２００８年にすぼぼだ博士が始めてＲａｓシグナルが関与しているということを示しました。興味深いことにラスと脂質シグナルは結びついている。よって、脂質シグナルも何か関係があるのではないかと期待しております。 一つのスパインを調べることそんなに必要なの？ 大事です。そもそも脳を研究する究極の目的は、脳を完全に理解することです。理解することができれば、それをターゲットとした薬も作ることができる。しかし、現在、記憶を担う記憶の回路については、ほとんどブラックボックスなのです。いきなり難しいことはできない。記憶の最小単位のシナプスがどのような回路パターンで振舞っているのかを調べることができれば、次の高次構造を調べることができる。さらに、神経細胞レベルで調べることができれば、もっと、神経同士のクロストークを調べることができます。だから、スパインでのいろいろな角度からの情報がほしいのです。だから調べることは意義があります。 クラスター化することってそんなに大事なの？ これから調べるのでなんとも言えませんが、大事だと考えられます。 これは、ちょっと、大胆な仮説でありますが、例えばりんごという情報を記憶したとする。その時、周りのスパインにも影響を及ぼします。これによって、りんごに付随する情報、赤い、おいしいなどのものを近傍に入力しやすくします。すると、今度思い出すとき、神経回路にとって効率よく思い出すことができる。そのようなことを念頭に考えております。 このためには、例えば、これに脂質シグナルが関与するかを調べるためには、脂質シグナルを樹状突起上で阻害するような、マウスを作ってやって行動解析を行うことによって何か情報が得られるのではないか？もし、この実験でうまくいけば、そのようなことも可能だと考えられます。 カレルのパクリじゃないの？ Ｒａｓシグナリングは、１０マイクロメートル。ねいちゃーのやつも１０マイクロメートル。 病気と脂質シグナルの関係は？ 最近、報告された例は、２００８年にアルツハイマー病に関与するＡｂたんぱく質を皮質一時神経細胞に加えるとＰＩＰ２の量を減らすことが報告された。これは、カルシウム依存的で、しなぷとじゃにんを発現していないラットでは、ＰＩＰ２の起きないことがわかっている。よって、Ａｂの影響は、しなぷとじゃにんを介してＰＩＰ２を減らすことで神経細胞の不全を起こしているのではないか？と考えています。ダウンシンドロームのモデルマウスでＰＩＰ２の量が減っているということも知られております。また、加齢マウスでは、ＰＩＰ２の量が減っていることが知られて、ＰＩＰ２の原料となる脂肪酸を加えるとＰＩＰ２が増えてさらにシナプス可塑性があがることが知られています。また、PIP3シグナルの下流のGSKたんぱく質が、加齢における記憶の再固定に関わっていることが、ノックアウトマウスを使った実験から明らかになっている。 ＦＬＩＭに最低限必要なこととは？ １．８０ＭＨｚのパルスレーザー ２．高感度の光電子増倍管 ３．ナノ秒オーダーで蛍光寿命を取得するハードウェア 蛍光寿命についてもう少し詳しく教えてください。 蛍光体が励起光を受けると励起状態になります。ここでの滞在時間が蛍光寿命です。励起光が基の準位に戻るときには、３つの過程でもどります。発光遷移（光）、無放射遷移（熱）、蛍光共鳴エネルギー移動です。ここにあくせぷたーがあると、Ｓ１状態での蛍光体の滞在時間が短くなる。よって、蛍光寿命を表す減衰曲線が短くなります。 やることたくさんあるけれど、現実可能なのか？ やるべきことの重要なポイントとしては。 １．２光子顕微鏡のセットアップ。およびグルタミン酸アンケイジングシステム。これは、ＭＩＴ時代に習いましたので、単純に組み立てるだけです。 ２．ＦＬＩＭのセットアップ。これも、脂質プローブではありませんが、すでに、ＦＬＩＭを取るためのノウハウはありますので、あとは、組み立てるだけです。 ３．プローブ作りおよびその改良は、１年目で行えます。 ４．一度、このようにＦＬＩＭが取れる設備が完了すれば、後は、とるだけですのでどのように研究を進めるかというアイディア勝負になると思います。ですので、多くは見えますが、１年あればセットアップはできます。 俺は、こうじゃなくてもいいんじゃない？という質問に弱い。 あと、今まで、考えたことがないようなことを聞かれると弱い。 だけど、これに関しては誰でも一緒。 次に、脂質の移動を止めるために、セプチンたんぱく質を強制発現します。発現します。このたんぱく質は、図のようにスパインネックに発現します。緑がＧＦＰセプチン、赤は神経細胞の形状のマーカーです。セプチンは３ｎｍほどのたんぱく質でこれらがオリゴマーを形成し、スパイン脂質の移動を阻害します。この状態で、一つのシナプスを刺激します。すると脂質の移動は阻害されますから、隣接するスパインの大きさの変わり方は、遠くのシナプスと変わらないのではないかと推測できます。 この実験によって、脂質シグナルがシナプスのクロストークに必要であるかを検証します。 ジーンがんの効率 これは、ばいおらっどとも話したのですが、まず、金粒子が入る確率および発現効率とも調べてないからわかっていないようです。そして、金が入ることによって、死んでしまう細胞も中にはあるかもしれないです。うまい具合に入ったものだけが光る。選択性は多少あります。しかし、この理由はわかりません。入った細胞だけが変なんじゃないの？その可能性は１００％否定できるわけではありません。しかし、２つあって、一つは、われわれの用いているシナプス構造可塑性に関しては、問題がないこと。また、他の研究者もこれ以外に遺伝子を導入する方法はなく、これを使っていること。入った細胞だけ大きさが変わっているんじゃないの？実はというと、電顕でアンケイジングしたスパインを見たものがあります。やはり変わっていました。 それって、ＭＩＴでやったことでしょ？そういうの出しちゃだめだよ。 ２光子顕微鏡のメリットは？共焦点との違いは？ 励起光が違う。 中まで到達することができる。紫外光による細胞ダメージはない。 ただ、スライスの表面などでは、共焦点でも細胞体は見ることが可能である。 ただ、ゆくゆくはねずみの頭などで行うには、共焦点では明らかに見えません。この理由は赤外光だから ２光子顕微鏡の分解能は、共焦点と同じくらいで200-300 nmくらい？ しかし、ｚ軸分解能はとても悪くなる。 また、実際には、うちのシステムは、共焦点ではできません。というのは、あんけいじんぐは、光分解を一点で行う必要があります。共焦点では、できない。 脂質とプローブの関係はどうなっているのか？ 普通培養細胞は、１ｐｌくらいだと考えられています。 スパインの中は０．１ｆｌから０．０１ｆｌくらい 大体、１００倍くらいだと考えられます。 大体、ＤＡＧは、１ｆモルです。一細胞に。 だから、１０あぷとモルくらいある。 ＰＩＰ３の場合は、その１００倍くらい少ないから。１００ゼプト盛るくらいあります。これが、刺激によって１０倍くらいに変わるといわれています。 脂質プローブと脂質の結合能は、かなり高いですから、始めから結合していると考えられます。ここで、刺激が加わると、破壊分析の結果などを参考にしますと１０倍から最大で５０倍くらいの脂質ができます。これに、プローブが反応して応答するということになります。これは、プローブ全部を応答させるための量く らいできます。 ＦＬＩＭについてもう少し教えて？ ＦＬＩＭのメリットは？他にないの？ 蛍光強度比フレットだと、ＹＦＰのスペクトルが漏れて、ＹＦＰも励起してしまう。あと、ＹＦＰの蛍光のＣＦＰへの漏れこみも問題になってくる。 しかし、ＦＬＩＭでは、ＹＦＰが消えているので問題ない。 現在は、場所をきちんと記憶できるようなステージがあるので、これを用いてシナプスの場所を特定して、アンケイジングを行って免疫染色を行うというのは不可能なのか？ 答え。ポイントは、リアルタイムでとることができないということになるでしょう。２番目には、刺激前と後で比較を行うことができないということです。 あなたのプローブ本当にそのように働いているの？ 例えば、グリシングリシンを除くとうまく働かなくなる。また、脂質局在ドメインを除いた細胞質プローブではうまくいかないなどの点から、確かに、このプローブのポイントとなるところがきちんと働いて脂質を検出していると考えられます。 現在、FLIMを行っている人の研究者はどれくらいいるの？ 神経細胞ということで、ＦＬＩＭの論文を出しているというところになると、３人ほど思い出します。一人目はハーバードのＭＧＨで、アルツハイマー病のマウスやラットにおいて、カルシウムシグナルがどのように変化しているかを調べているぶらいあんばくすかい博士。しかし、この研究はシナプスではなく主に細胞体で調べております。次に、スパインレベルであると、かなり少なくて、かれるすぽぽだと、やすだりょうへい博士です。やすだ博士はかれるのぽすどくでした。近年、ＭＩＴ時に林研で作製したＣａＭｋＩＩプローブをＦＬＩＭに改良してＣａＭｋＩＩの活性を調べて高い評価を受けたことは記憶に新しいです。 脂質の動態ということになると、培養細胞レベルでは、京都の松田先生が、私たちのプローブを用いて脂質の動態を観察しております。斉藤尚明先生がＰＫＣの活性化を調べております。 Ｒｏバリューはどれくらい。５０から６０Åくらい。 ２光子と共焦点の違い 実際、共焦点でもスライスくらいだったら神経細胞体のカルシウムイメージングなどは可能である。 今まで、細胞質タイプのプローブで見られていると思うけれどあれじゃだめなの？ はい、まず大前提にあるのは、細胞質タイプのプローブで調べられているのは、神経細胞全体を刺激しているということ。そうすると、全体が刺激されるので、プローブの局在をみることができます。しかしながら、一点でグルタミン酸刺激を行うと、細胞質タイプでは見ることができません。何故かと言うとポイントは、バックグラウンドです。 どのくらいの長さイメージングするの？シナプス構造可塑性の実験では、大体一時間くらい。ですので、一時間くらい観察しようと考えております。 プローブの局在はどうなるの？私のプローブ分子には、Ｎ－ｒａｓの脂質修飾ドメインがついております。スパインおよび樹状突起です。 メカニズムは？ファルネシル基で小胞体に結合し、パルミトイル基で細胞膜に結合します。 昔の研究のぽいんとは？ 私のプローブ分子の特徴は、２点あります。 それによって、図で示す。 透明ＹＦＰの原理？ 蛍光は、蛍光体が高い順位から低い順位に移るときに起きます。 その際に、発光遷移のほかに、２つ影響を受けるものがあります。 一つは、無放射遷移、これは、熱によるもの。 ２つめは、蛍光共鳴エネルギー移動。 透明なＹＦＰの場合は、この無放射遷移で起きています。 この研究で困難だと思われるところはどこでしょうか？ カルシウムシグナリングとの関係は？ カルシウムによって、ＣａＭＫＩＩなどが活性化しシナプス可塑性を誘導します。阻害剤を加えた実験から、カルシウムシグナリングも脂質シグナルもどちらも、シナプス可塑性に重要であることがわかっています。しかしながら、カルシウムシグナリングは、スパインで留まることが知られています。よって、シナプスのクロストークはむしろ代謝型グルタミン酸受容体が関与しているのではないかと考えております。しかしながら、グルタミン酸受容体の下流の脂質シグナルは、カルシウムシグナリングに比べてほとんどわかっておりません。よって、調べるために意義のあることだと考えます。 岡本さんのＦＲＥＴの図と安田さんの図 これすべて、すでにできているんじゃない？ 簡単にできるんじゃないの？ 確かに、２光子顕微鏡のセットアップ、アンケイジングシステムのセットアップ、ＦＬＩＭの測定のノウハウは知っていますが、実際組み立てるのはかなり時間がかかります。あっという間に１年かかります。逆に言うとそれくらいじゃないと３年間では終わりません。 他に、どんなＦＲＥＴプローブを作ったら面白いの？ ＦＬＩＭは本当に高感度か？ シナプス可塑性ってどうやって測るの？ ＭＩＴ時代には何をやってきたのですか？ 大きく分けて３つあります。２行使顕微鏡のセットアップのノウハウ。アンケイジング法のノウハウ。ＦＬＩＭの測定のノウハウ。実際、私、昔脂質の研究を行っていまして、脳という新しい分野に挑戦するに当たって、脳のことほとんど知らなかったので、しかも、初めての海外ということで言葉は通じないし、林先生に朝から晩まで働かされるし、本当に大変でした。 ＦＬＩＭとかだしちゃっておかしくない？書いてないよ？ ２点ありまして、１点目は、申請書に書ききれなかったということ。 ２点目は、私は、常に面白いアイディアを考えております。よって、面白いものがあれば、どんどんアップデートをしていきます。 何か、脂質シグナルがシナプスのクロストークに関係しているという証拠はあるの？ 確定的な証拠はありません。間接的な証拠としましては、ＰＩＰ３シグナリングは、１時間以上も続いているということ。これは、高頻度の電気刺激をおこなっってシナプス可塑性を誘導したときに、ＰＩＰ３産生酵素ＰＩ３Ｋの阻害剤であるＬＹ２９を加えたときに、シナプス可塑性が阻害されるということからわかります。よって、脂質の速報拡散は、０．５μｍ・秒なので、十分に樹状突起を移動することができるということ。ラスたんぱく質のシグナルが樹状突起を介して隣のシナプスに移動し、スパインのシナプス可塑性の閾値を下げるということは報告されています。もちろん、脂質シグナルは、ラスたんぱく質の上流に位置しているわけですから、脂質シグナルがどのようにラスたんぱく質を制御しているかを調べることは興味深いと考えられます。 では、他に何か面白いテーマはないの？ 確かに、ＰＩＰ２は、シナプス前膜で調べられているので、ベシクル小胞が放出する際に、このプローブをシナプス前膜に導入しておいてどのような時に産生しているのかということを調べることは重要です。それよりも、私が興味を持っているところは、シナプス構造可塑性、つまり、シナプスが大きくなるときに、劇的に脂質の量が増えているわけです。短期間でのこの脂質の増加は、ちょっと信じられません。例えば、細胞分裂は５時間ほどをかけて１つが２つになるわけですが、この可塑性に関しては、１分以内に２倍以上になるわけです。この時、とんでもなく脂質代謝が動いていると想像できます。そのパスは２つあって、１つは、細胞膜で激しく脂質産生酵素が動いていること。もう一つは、トランスゴルジなどから激しく膜輸送が起きること。どちらかを調べることはとても面白いと考えております。 私は、常に、よくなるように考えております。ですので実験がよいと思えば変えます。本筋は外れておりません。 従来までのグルタミン酸を放出する方法。 バスアプリケーション。マイクロパフ。電気刺激 刺激はどのようにやっているの？ ０．５Ｈｚ．２ｍｓ、１Ｈｚなど。とにかく電気生理でシナプス可塑性が起きていれば大丈夫。 クロストークをとめたら連想がとまった。 脂質シグナルをとめたら連想することができなくなった。 How much does enlargement of spine happen? How much does lipid second messenger is there? Is it right to tell lipid signaling as controller of signal? What is the function of septin? Septin is discovered in1971 in budding yeast mutants defective in cell-cycle progression. If you overexpress the septin, not only lipids but also the protein, which localize in membrane, is stopped by the septin, right? I need to prepare the septin, which have mutant ATP binding site or mutant enzyme activity delation mutant. You should learn the mechanism the pathway until producing lipid second messenger. ラフトによって、もっと上流のたんぱく質は動くことがないのではないか？ Ｇたんぱく質はそるブルだから大丈夫。しかし、Ｇｂｒは膜局在型。代謝型グルタミン酸受容体はどのＧたんぱく質を活性化するのか？また、ＰＬＣデルタ、ＰＬＣβは泳ぐが大丈夫か？ ラフトとＰＩＰ３の関係は？ 確かに、ラフトみたいなところでできますが、物理的な面から言うと、ラフトは、比較的飽和脂肪酸を足に持った脂質がいるところです。ＰＩＰ３，ＤＡＧの足は、ステロイルアラキドノイルなので、ラフトをでることはあながちおかしくないと考えられます。 脂質の組成がミックスしないようにたんぱく質がバリアを作っているということは結構ある。らてらるとばそらてらる。 でんどらいとにのみ発現しているようなたんぱく質はないだろうか？ What size is lipid? ゴーシュ型でC-C 1.513; C-H 1.112 Å アンチ型でC-C 1.511C-H 1.112 Å 大体DAGは5Å, 10Å PIP3は10Å, 10Å PTEN, DGKをノックアウトしたらどのくらいまで伸びるのか？ 本当に脂質はシグナルの司令塔なの？ 西塚先生を出す。 デイビッドホロビンを出す。 脂質って細胞膜からどれくらい出ているのか？ＰＩＰ３だったら１５ｎｍ以上は出ていると思う。 もし、始めから脂質の移動が阻害されていたらどうする？ 確かに、CaMkIIはスパインでのみ活性化されることが知られている。 しかし、Rasは結構長く伸びることが知られている。 脂質の移動を阻害するものの有力なものとして、セプチンがあげられるのですが、エンドジーニアスなセプチンもあります。ただ、結構、すべてのスパインネックに存在しているわけではなく、もしかしたら、脂質の移動を変えるような働きをしている可能性があります。クロストークに選択性があるということでとても面白いということになります。 脂質シグナルをスパインで見ることの重要性。 ２光子顕微鏡のメリットとは？ 共焦点でも、スライスでも見えるんじゃないの？ 別に、２光子顕微鏡で見なくてもいいんじゃないの？ 何故あなたは脂質シグナリングを選んだのか？ 1．脂質シグナルは移動することができるシグナルの最上流である。 2．脂質シグナルの特にＰＩＰ３シグナリングはしばらくの間持続する。 ＰＫＣの局在を見てみるとデンドライトでも起きている。やっぱり脂質は移動していると考えられる。 実は、かれるによって、らすシグナルが閾値の上昇に必要だということがわかっている。しかしながら、何故ラスなのか？実は、ラスはＰＩＰ３の下流なんですよね。 PTENの局在。 DGKの局在。DGKはカルシウムによって活性化されるが、神経細胞でのカルシウムの上昇は瞬時である。 これによって、あるシグナルに反応しやすくなるようになり、ある反応に応答するシナプスクラスターができるのではないだろうか。 シナプスのクロストークに脂質シグナリングが関係していなかったら？ 脂質修飾のメカニズムについて。 ＰＩＰ２の局在は？下の論文にあるように恐らく均一に存在する。 しかし、結局のところ活性化されたグルタミン酸受容体がどこにあるかが重要でさらに、活性化したＰＩ３ＫとＰＬＣがどこにあるかによる。 Neuroscience Letters 423 (2007) 158–161 もしかするとＰＬＣやＰＩ３Ｋがデンドライトまで泳いでいって、ＰＩＰ２を代謝することはないのか？ 恐らくないと思う。その根拠は、代謝型グルタミン酸によって活性化されるＰＩ３Ｋはｐ１１０ｒだと考えられます。 このたんぱく質は、脂質修飾を受けているたんぱく質とコンプレックスを作っている。 もしかしたら他の脂質修飾されていないようなたんぱく質がＰＩＰ３を作る可能性があるかもしれないよ。 そしたら、それは、わかりません。ただ、ここで重要なのは、ＰＩＰ３ができて、それが樹状突起を移っていくことが観察できればいいのだと考えております。 ＰＩ３ｋは１，２，３型が存在する。そのうちＰＩＰ２を基質とするものは、Ｉ型だけである。一般的なＩ型のＡ型は、チロシンリン酸型受容体によって、活性化される。一方、Ｉ型のＢ型は、ｐ１１０γであり、これは、Ｇたんぱく質共役型受容体によって活性化される。Ｂｒとアダプターたんぱく質のｐ１０１と複合体を形成する。このため、かなり移動度が遅いと考えられる。よって、ＰＩＰ３のような低分子の方がかなり早く動けるのではないかと考えております。 よって、ＰＩＰ３の量は、ＰＴＥＮとＰＩ３Ｋのバランスで決まっている。しかし、 ＰＩＰ３を作り出す刺激は、グルタミン酸受容体だけなの？ いえ、恐らく他にもあるとかんがえられます。しかしながら、今回絞っているのはグルタミン酸受容体だけです。 ＤＧＫはどこにいるの？細胞質中にいますが、ＤＧＫは、９つのアイソフォームがあって、α、βは、ＰＳＤ結合ドメインを持っていないが、γ、ζはもっている。基本的に、デンドライトシナプスにいるが、後者は、ＰＳＤに濃縮されている可能性もある。 別にあなたのプローブじゃなくてもサイトゾルプローブで赤と緑比較してできるんじゃないの？ 実は、それでは難しいです。というのは、仮に、フレットプローブと膜局在プローブが培養細胞などで１００％応答した場合どちらも、最高の状態となります。しかし、神経細胞においては、デンドライトと繋がっていますから、さらに、プローブが入ってしまうわけです。すると、膜局在方はこの赤と緑がバックグランドとなって、感度が小さくなってしまうということがあげられます。よって、ＦＲＥＴプローブの方が応答はよいであろうと考えら得ます。 mGluRによって活性化されるPI3Kとして、IB型が挙げられる。これは、Ｇｂｒによって活性化される。 ちなみに、NMDA依存的にＰＩＰ２が減少する系も存在する。これには、２つの可能性が挙げられる。ＰＬＣが泳いでいった。もしくは、樹上突起にも受容体が多少なりとも存在し、それが活性化した。しかし、今調べたいのは、スパインから産生された脂質分子であるから系が全く違うと考えられる。 ＰＩＰ３は、様々な方法で産生されると考えられる。スパインにはチロシンキナーゼ受容体EPH受容体なども存在するだろう。だから、ＰＩＰ３が産生されるメカニズムはたくさんあると考えられる。しかしながら、今回はグルタミン酸受容体を考えているからそれによって活性化されるのは、代謝型グルタミン酸受容体だと考えられる。 もしかすると、ｂｒが移動するかもしれない。しかしながら、脂質とＧたんぱく質どっちが移動が早いかというと、ｇｒの方が大きいから移動しづらいと考えられる。 Rasの活性化は、11microm//4 minである。とても遅い。結局、上流のシグナルがどうなっているかについての情報は何も与えないことになる。 クロストークを行うと何がいいのか？ スパインネックが見えないんだけれどどういうこと？本当にくっついているの？ 何分後に刺激をするの？ どんな点が困難だと考えられるのか？ 逆に、スパインで制限されたらどうするの？ 答。もちろん計画を立てるときには一番面白い作業仮説をたてるわけであります。それはそれで面白いと考えられる。その一つとしてセプチンが上げられます。 普段から脂質はセプチンによって抑えられているんじゃないの？ セプチンは、細胞質のたんぱく質の拡散も防ぐんじゃないの？ それは、ＧＦＰを発現させてホトブリーチすればよい。 それを調べるためには、セプチンＲＦＰを発現させて本当にセプチンが阻害するかを調べればよい。 スパインの大きさってどれくらい？ シナプスのクロストークにプラスマイナスはあるのか？ タイトルはゴシックにする。 申請者の利点はちょっと変えるべき。 何故ＦＲＥＴを使うか？理由を述べる、 脂質シグナルをわからせる １０出たものが拡散してしまうと３になってしまう。それでよいのか？ セプチンの情報 あるセプチンは、ＰＩＰ２などとくっついて膜のbracingを起こす。Septin-mediated uniform bracing of phospholipid membranes. Tanaka-Takiguchi Y, Kinoshita M, Takiguchi K. Curr Biol. 2009 Jan 27;19(2) 140-5. ＤｉＩは分裂溝を通る。 ただ、Ｄｉｌは細胞膜の表面に入ることから表側である可能性が高い。 細胞膜の成分をミックスしないで、そのまま分けるという役割を持っているたんぱく質の一つにセプチンというたんぱく質があります。セプチンは、主に細胞分裂の際に分裂溝にセプチンリングを形成し、細胞分裂に必要なたんぱく質です。また、細胞膜上の成分をミックスしないようにしているからです。 ですので、 スパインのコンパートメントについて カルシウムは、シナプスで制限される。 ＣａＭＫＩＩも同様に制限される。 しかしながら、Ｒａｓたんぱく質は制限されずに、クロストークに必要である、ただ、ラスたんぱく質は、カルシウムシグナリングによって活性化される。ＬＹ PTENの局在について 基本的に、PTEN is preferentially expressed in neurons and is especially evident in Purkinje neurons, olfactory mitral neurons, and large pyramidal neurons. To analyze the function of PTEN in neuronal differentiation シングルセルでは、核と細胞質中に存在することがわかっている。 一人目の先生が、免疫染色でＰＩＰ３の進展は確認されているの？という質問をしてきた。俺は、前に佐々木とそのことについて話していたにも関わらず、うまく説明することができなかった。結局、リアルタイムで取れることが大事だという風に言ってしまったが、そうじゃない。本当の答えは、シナプス構造可塑性を起こしたスパインを、一度視野からはずして、免疫染色して見るというのは極めて不可能に近いということである。そのように答えないと正解とはいえない。今考えてみると、ちょっと、彼も不思議そうな顔をしていた。
https://w.atwiki.jp/bladechronicle/pages/14.html
#freeze #nofollow #norelated テキスト整形のルール 通常は入力した文章がそのまま出力されます。 HTMLのタグは効果がありません。書かれた文章はそのまま(「 font color="red" text /font 」といった形のまま)表示されます 段落と段落の区切りには空行をはさんで下さい。空行をはさまず、連続している複数の行は同じ段落と解釈されます (連結して表示されます) これに加えて、特定のルールによるテキスト整形を行うことができます。以下では、プラグインについてはよく使われるものだけを簡略に説明しています。プラグインのオプションなど詳細な説明については PukiWiki/1.4/Manual/Plugin を参照してください。 テキスト整形のルール [#oca54177] ブロック要素 [#vd593893] 段落 [#n6691793] 引用文 [#af1781b1] リスト構造 [#q8abd9a8] 整形済みテキスト [#g72f3a72] 表組み [#k7c49df4] CSV形式の表組み [#zc726b7e] 見出し [#z15343da] 目次 [#l6dfa631] 左寄せ・センタリング・右寄せ [#bbc1f21c] 水平線 [#s9799d2c] 行間開け [#j2656808] 添付ファイル・画像の貼り付け [#p1971296] テキストの回り込みの解除 [#a800a528] フォーム [#x23849ca] インライン要素 [#l7110f11] 文字列 [#bd24e4ad] 改行 [#f383c24f] 強調・斜体 [#n38a029f] 文字サイズ [#t513b12d] 文字色 [#sf40816a] 取消線 [#r81ec79f] 注釈 [#s21cf12e] 添付ファイル・画像の貼り付け [#v181e939] ルビ構造 [#j137cd8e] アンカーの設定 [#mb297616] カウンタ表示 [#h7beb6ac] オンライン表示 [#ab42f827] バージョン表示 [#f09f9e4b] WikiName [#u8188184] ページ名 [#gce935d9] InterWiki [#g0dec0fe] リンク [#bd6593e1] エイリアス [#u1026558] 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段落は、新たなブロック要素が現われるまで継続します。 段落は、他のブロック要素の子要素になることができます。 段落は、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 引用文 インライン要素 行頭で を指定すると、引用文になります。引用文は 、 、 の3レベルあります。 引用文の中は、ブロック要素を明示しない限り、段落となります。 引用文は、空行が現われるまで継続します。 引用文内の段落は、新たな引用文またはブロック要素が現われるまで継続します。 引用文は、他のブロック要素の子要素になることができます。他の引用文の子要素にする場合は、レベルを1段増やして記述します。リスト構造の子要素にする場合はレベルを1段増やさずに記述します。 引用文は、他のブロック要素を子要素にすることができます。引用文の子要素となるリスト構造はレベルを1段増やさずに記述します。 リスト構造内の引用文から脱出する場合で、リスト構造を継続する場合は、 、 、 を行頭に記述します。 リスト構造 - インライン要素 行頭で - を指定すると、番号なしリストになります。番号なしリストは -、--、--- の3レベルあります。 番号なしリストは、他のブロック要素の子要素になることができます。他のリスト構造の子要素にする場合は、レベルを1段増やして記述します。引用文の子要素にする場合は、レベルを増やさずに記述します。 -の直後に ~を記述すると段落を子要素にすることができます。 番号なしリストは、リストの先頭がインライン要素または段落である場合に限り、リストの次の行に他のブロック要素を記述することで、他のブロック要素を子要素にすることができます。 + インライン要素 行頭で + を指定すると、番号付きリストになります。番号付きリストは +、++、+++ の3レベルあります。 番号付きリストは、他のブロック要素の子要素になることができます。他のリスト構造の子要素にする場合は、レベルを1段増やして記述します。引用文の子要素にする場合は、レベルを増やさずに記述します。 + の直後に ~ を記述すると段落を子要素にすることができます。 番号付きリストは、リストの先頭がインライン要素または段落である場合に限り、リストの次の行に他のブロック要素を記述することで、他のブロック要素を子要素にすることができます。 定義語 | 説明文 行頭を で始め、| 記号で区切ると、定義リストになります。定義リストは 、 、 の3段階あります。定義リストの定義語、説明文は省略することができます。複数の連続した定義リストを記述し、2つ目以降の定義語を省略することで1つの定義語に対する複数の説明文を記述することができます。 行中に | がないと定義リストにはなりません。 定義語・説明文は、インライン要素のみ記述することができます。 定義リストは、他のブロック要素の子要素になることができます。他のリスト構造の子要素にする場合は、レベルを1段増やして記述します。引用文の子要素にする場合は、レベルを増やさずに記述します。 | の直後に ~ を記述すると段落を子要素にすることができます。 定義リストは、定義リストの次の行に他のブロック要素を記述することで、他のブロック要素を子要素にすることができます。 整形済みテキスト 行頭が半角空白で始まる行は整形済みテキストとなります。行の自動折り返しは行なわれません。 整形済みテキストは、他のブロック要素の子要素になることができます。 整形済みテキストは、他のブロック要素を子要素にすることができません。 整形済みテキストは、すべての子要素を文字列として扱います。 表組み | インライン要素 | インライン要素 | 行頭から | でインライン要素を区切ることで表組みになります。 各要素の先頭に下記の記述子を指定できます。 LEFT CENTER RIGHT BGCOLOR(色) COLOR(色) SIZE(サイズ) 要素の表示位置及び背景色・文字色・文字サイズ(px単位)を指定します。デフォルトは左寄せになります。 表組みの 各セルの要素の配置に 関するサンプル 左寄せ センタリング 右寄せ 右寄せ 左寄せ センタリング 行末にcを記述すると、書式指定行となります。書式指定行では、次の記述子が指定できます。 LEFT CENTER RIGHT BGCOLOR(色) COLOR(色) SIZE(サイズ) 記述子の後ろに数値を記述すると、セル幅がpx単位で指定できます。 行末にhを記述すると、ヘッダ行(thead)になります。 行末にfを記述すると、フッタ行(tfoot)になります。 セル内のインライン要素の先頭に~を付けると、ヘッダ(th)になります。 セル内に を単独で記述すると右のセルと連結します(colspan)。 セル内に ~ を単独で記述すると上のセルと連結します(rowspan)。 表組みは、他のブロック要素の子要素になることができます。 表組みは、他のブロック要素を子要素にすることができません。 CSV形式の表組み ,データ,データ,… 行頭でカンマ(,)を記述し、インライン要素をカンマ区切りで記述すると表組みになります。 インライン要素はダブルクォーテーション(")で囲むことができます。ダブルクォーテーションで囲むことで、カンマ(,)を含むインライン要素を記述できます。 ダブルクォーテーション(")で囲んだデータの中で、ダブルクォーテーションを2つ("")続けることで、ダブルクォーテーション(")を含むインライン要素を記述できます。 インライン要素の代わりにイコールを2つ(==)記述すると、colspanを意味します。 インライン要素の左に1つ以上の半角空白文字を記述すると右寄せに、インライン要素の左右に1つ以上の半角空白文字を記述するとセンタリングになります。 表組みは、他のブロック要素の子要素になることができます。 表組みは、他のブロック要素を子要素にすることができません。 見出し * インライン要素 行頭で * を記述すると、見出しになります。見出しは *、**、*** の3段階あります。 見出しは、他のブロック要素の子要素になることはできません。見出しが現われると他のブロック要素は終了します。 見出しは、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 目次 #contents 行頭で #contents を記述すると、見出しに基づいて目次を作成します。一般的に #contents はページの最初のほうに記述します。 目次は、他のブロック要素の子要素になることができますが、トップレベルに設置することを前提に左マージンを設定してありますので、他のブロック要素の子要素にはしないでください。 目次は、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 左寄せ・センタリング・右寄せ LEFT インライン要素 CENTER インライン要素 RIGHT インライン要素 行頭で LEFT 、 CENTER 、 RIGHT を記述すると、インライン要素が左寄せ、センタリング、右寄せされます。 LEFT 、CENTER 、RIGHT は、他のブロック要素の子要素になることができます。 LEFT 、CENTER 、RIGHT は、他のブロック要素を子要素にすることができません。 水平線 --------------------------------------------- 行頭で4つ以上の - を書くと水平線になります。 水平線は、他のブロック要素の子要素になることはできません。水平線が現われると他のブロック要素は終了します。 水平線は、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 #hr 行頭で #hr を記述すると、区切り線になります。区切り線は上位のブロック要素の幅の60%の長さの水平線がセンタリングされて引かれます。 区切り線は、他のブロック要素の子要素になることができます。 区切り線は、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 行間開け #br 行頭で #br を記述すると、ブロック要素間またはブロック要素内で行間を開けることができます(*2)。 行間開けは、他のブロック要素の子要素になることができます。 行間開けは、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 添付ファイル・画像の貼り付け #ref(添付ファイル名) #ref(ファイルのURL) 行頭で #ref を記述すると、添付ファイルまたは指定されたURLにあるファイルへのリンクを貼り付けることができます。ファイルが画像ファイルの場合は、その画像を表示します。 #ref には、カンマで区切って下記のパラメタを指定できます。パラメタを省略した場合はデフォルト値となります。 添付ファイルのページ 添付ファイルが存在するページ名を指定します。デフォルトは現在のページです。 このパラメタを指定する場合は、添付ファイル名の次に記述します。 left center right ファイルへのリンク・画像を表示する位置を指定します。デフォルトではセンタリングされます。 wrap nowrap ファイルへのリンク・画像を枠で囲むかどうかを指定します。デフォルトは囲みません。 around テキストの回り込みを指定します。デフォルトでは回り込みを行ないません。 nolink デフォルトでは添付ファイルへのリンクが張られますが、nolinkを指定するとリンクを張りません。 代替文字列 ファイル名の代わりに表示する文字列や画像の代替文字列を指定できます。指定しない場合は、ファイル名になります。 代替文字列には文字列以外のインライン要素を含めることはできません。ページ名、文字列以外のインライン要素を記述しても文字列として扱われます。 このパラメタを指定する場合は、最後に記述します。 #refは、他のブロック要素の子要素になることができます。 #refは、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 テキストの回り込みの解除 #clear 行頭で #clear を記述すると、 #ref で指定したテキストの回り込みを解除します。 #clear を指定しなくても、記事の末尾でテキストの回り込みが自動的に解除されます。 #clearは、他のブロック要素の子要素になることができます。 #clearは、他のブロック要素を子要素にすることができません。 フォーム #comment 行頭で #comment を記述すると、コメントを挿入するためのフォームが埋め込まれます。 #commentは、他のブロック要素の子要素になることができますが、トップレベルに設置することを前提に左マージンを設定してありますので、他のブロック要素の子要素にはしないでください。 #commentは、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 #pcomment 行頭で #pcomment を記述すると、コメントを挿入するためのフォームが埋め込まれます。 #comment とは異なり、コメントは別ページに記録されます。また、コメントに対するレスポンスを階層状に表示します。 #pcommentは、他のブロック要素の子要素になることができますが、トップレベルに設置することを前提に左マージンを設定してありますので、他のブロック要素の子要素にはしないでください。 #pcommentは、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 #article 行頭で#articleを記述すると、簡易掲示板のフォームが埋め込まれます。 #articleは、他のブロック要素の子要素になることができますが、トップレベルに設置することを前提に左マージンを設定してありますので、他のブロック要素の子要素にはしないでください。 #articleは、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 #vote(選択肢1,選択肢2,...) 行頭で #vote を記述すると、簡易投票フォームが埋め込まれます。 選択肢は文字列、ページ名、InterWiki、リンクを含めることができます。その他のインライン要素を含めることができません。 #voteは、他のブロック要素の子要素になることができますが、トップレベルに設置することを前提に左マージンを設定してありますので、他のブロック要素の子要素にはしないでください。 #voteは、他のブロック要素を子要素にすることはできません。 インライン要素 インライン要素は、必ずブロック要素の子要素になっています。 行頭書式でブロック要素を明示しない場合は、段落の子要素となります。 行頭書式でブロック要素を明示した場合は、指定したブロック要素の子要素になります。 特定のインライン要素は、他のインライン要素を子要素にすることができます。 インライン要素はブロック要素を子要素にすることはできません。 インライン要素となるプラグイン及びユーザー定義は 〜; の形式になっています。 インライン要素となるプラグインに対してオプションと子要素を指定する場合は、 プラグイン名(オプション){子要素}; の形式になります。 文字列 文字列 文字列はインライン要素です。 文字列は、他のインライン要素の子要素になることができます。 文字列は、他のインライン要素を子要素にすることができません。 改行 インライン要素~ 行末に~を書くと行末改行になります。行末改行はブロック要素内での改行になります。 行末改行の次の行の行頭書式は無効になり、文字列として扱われます。 行末改行は、他のインライン要素の子要素になることはできません。 行末改行は、他のインライン要素を子要素にすることはできません。 行末改行は、定義リストの定義語、表組みの要素、#で始まるブロック要素のパラメタの中では使用できません。 br; 行中に br; を書くと、そこで改行されます。行末の ~ と違い、定義リストの定義語や表組の要素、# で始まるブロック要素のパラメタの中でも使用できます。 行中改行は、他のインライン要素の子要素になることができます。 行中改行は、他のインライン要素を子要素にすることはできません。 強調・斜体 インライン要素 行中のインライン要素を #39; #39; ではさむと、インライン要素が 強調表示 になります。 強調は、他のインライン要素の子要素になることができます。 強調は、他のインライン要素を子要素にすることができます。 インライン要素 行中のインライン要素を #39; #39; #39; ではさむと、インライン要素が 斜体表示 になります。 斜体は、他のインライン要素の子要素になることができます。 斜体は、他のインライン要素を子要素にすることができます。 文字サイズ size(サイズ){インライン要素}; 行中に size を書くとインライン要素の文字サイズを指定することができます。サイズはピクセル単位(px)で指定します。例えば20を指定すると、20ピクセルの文字の大きさになります。 文字サイズは、他のインライン要素の子要素になることができます。 文字サイズは、他のインライン要素を子要素にすることができます。 文字色 color(文字色,背景色){インライン要素}; 行中に color と書くとインライン要素の 文字色 と 背景色 を指定することができます。背景色は省略できます。 色の指定は、次のいずれかの形式で行ないます。 色を意味するキーワード(red, blueなど) #16進数6桁 #16進数3桁 文字色は、他のインライン要素の子要素になることができます。 文字色は、他のインライン要素を子要素にすることができます。 取消線 %%インライン要素%% 行中のインライン要素を #37; #37;ではさむと、インライン要素に取消線が付きます。 取消線は、他のインライン要素の子要素になることができます。 取消線は、他のインライン要素を子要素にすることができます。 注釈 ((インライン要素)) 行中でインライン要素を #40; #40; と #41; #41; ではさむと、注釈(*3)が作成され、行中に注釈へのリンクが貼られます。 注釈は、他のインライン要素の子要素になることができます。親要素は注釈文ではなく、注釈へのリンクに反映されます。 注釈は、他のインライン要素を子要素にすることができます。子要素は注釈文に反映されます。 添付ファイル・画像の貼り付け ref(添付ファイル名); ref(ファイルのURL); 行中で ref を記述すると、添付ファイルまたは指定されたURLにあるファイルへのリンクを貼り付けることができます。ファイルが画像ファイルの場合は、その画像を表示します。 ref には、カンマで区切って下記のパラメタを指定できます。パラメタを省略した場合はデフォルト値となります。 添付ファイルのページ 添付ファイルが存在するページ名を指定します。デフォルトは現在のページです。 このパラメタを指定する場合は、添付ファイル名の次に記述します。 nolink デフォルトでは添付ファイルへのリンクが張られますが、nolink を指定するとリンクを張りません。 代替文字列 ファイル名の代わりに表示する文字列や画像の代替文字列を指定できます。指定しない場合は、ファイル名になります。 代替文字列には文字列以外のインライン要素を含めることはできません。ページ名、文字列以外のインライン要素を記述しても文字列として扱われます。 このパラメタを指定する場合は、最後に記述します。 ref は、他のインライン要素の子要素になることができます。 ref は、他のインライン要素を子要素にはできません。 ルビ構造 ruby(ルビ){インライン要素}; 行中で ruby を書くとインライン要素に対するルビをふることができます。ルビに対応していないブラウザではルビが本文中に ( と ) に囲まれて表示されます。 ルビ構造のルビにはインライン要素を記述します。ただし、ルビの特性上、期待通りの表示になるとは限りません。 ルビ構造は、他のインライン要素の子要素になることができます。 ルビ構造は、他のインライン要素を子要素にすることができます。 ルビ構造をルビ構造の子要素にはできません(ネストはできません)。 注釈内や文字サイズを小さくしている部分での使用は、ルビが判読できなくなるので避けてください。 アンカーの設定 aname(アンカー名); aname(アンカー名){インライン要素}; 行中で aname を記述するとリンクのアンカーを設定することができます。リンクの飛び先にしたい位置に記述します。 アンカー名は、半角アルファベットから始まる半角アルファベット・数字・ハイフン・アンダースコアからなる文字列を指定します。 アンカー名の中には、全角文字や半角空白文字、半角記号を含めることはできません。 アンカー設定は、他のインライン要素の子要素になることができます。 アンカー設定は、他のインライン要素を子要素にすることができます。 カウンタ表示 counter; counter(オプション); 行中で counter を記述するとそのページにアクセスした人の数を表示することができます。 counter には次のオプションを指定できます。オプションを省略した場合はtotalが指定されたものとみなされます。 today 今日のアクセス数を表示します。 yesterday 昨日のアクセス数を表示します。 total アクセス総数を表示します。 カウンタ表示は、他のインライン要素の子要素になることができます。 カウンタ表示は、他のインライン要素を子要素にはできません。 オンライン表示 online; 行中で online を記述すると現在アクセス中の人数を表示することができます。 オンライン表示は、他のインライン要素の子要素になることができます。 オンライン表示は、他のインライン要素を子要素にはできません。 バージョン表示 version; 行中で version を記述するとPukiWikiのバージョンを表示することができます。 バージョン表示は、他のインライン要素の子要素になることができます。 バージョン表示は、他のインライン要素を子要素にはできません。 WikiName WikiName 行中で、1つ以上の大文字→1つ以上の小文字→1つ以上の大文字→1つ以上の小文字の組合わせからなる半角//文字列はWikiNameになります。 WikiNameの中には、全角文字や半角空白文字、記号、数字を含めることはできません。 WikiNameは、PukiWiki内のページ名になります。すでに存在するページであればそのページへのリンクが自動的に貼られます。存在しない場合はWikiNameの後ろに?が自動的に付き、そのページを新規作成するためのリンクが貼られます。 WikiNameは、他のインライン要素の子要素になることができます。 WikiNameは、他のインライン要素を子要素にはできません。 ページ名 [[ぷきうぃき]] 行中で #91; #91; と #93; #93; で囲まれた文字列はページ名になります。 ページ名の中には、全角文字、記号、数字、半角空白文字を含めることができます。 ページ名の中には、"# を含めることはできません。 すでに存在するページであればそのページへのリンクが自動的に貼られます。存在しない場合はページ名の後ろに?が自動的に付き、そのページを新規作成するためのリンクが貼られます。 [[ページ名#アンカー名]] ページ名にアンカー名をつけることもできます。 ページ名は、他のインライン要素の子要素になることができます。 ページ名は、他のインライン要素を子要素にはできません。 InterWiki [[InterWikiName ページ名]] 行中のページ名形式の文字列の中で、 で2つの文字列を区切るとInterWikiになります。 の前にはInterWikiNameのページで定義したInterWikiNameを、 の後ろにはページ名を記述します。 [[InterWikiName ページ名#アンカー名]] ページ名の後ろにアンカー名をつけることもできます。 InterWikiNameの中には、全角文字を含めることができます。 InterWikiNameの中には、半角空白文字を含めるができます。 InterWikiは、他のインライン要素の子要素になることができます。 InterWikiは、他のインライン要素を子要素にはできません。 リンク [[リンク名 URL]] 行中のInterWikiNameの形式の文字列の中で、 の前に任意のリンク名を、 の後ろにURLを記述すると、そのリンク名でURLに対するリンクを貼ることができます。 リンク名には、全角文字や半角空白文字を含めることができます。メールアドレスを指定する場合は、mailto を書かずにアドレスだけを記述します。 http //www.example.com/ https //www.example.com/ ftp //ftp.example.com/ news //news.example.com/ foo@example.com 行中に直接、URLを記述した場合は自動的にそのURLに対するリンクが貼られます。 記述したURLが画像ファイルである場合は、その画像を表示します。 リンクは、他のインライン要素の子要素になることができます。 リンクは、他のインライン要素を子要素にはできません。 エイリアス [[エイリアス名 ページ名]] 行中のページ名形式の文字列の中で、 で2つの文字列を区切るとエイリアスになります。 の前にはエイリアス名を、 の後ろにはページ名を記述します。 エイリアスはPukiWiki内のページ名とは別のエイリアス名で、指定したページへのリンクを貼ります。 [[エイリアス名 ページ名#アンカー名]] [[エイリアス名 #アンカー名]] ページ名にアンカー名を付け加えてアンカーへのリンクを貼ることができます。ページ名とアンカー名の間には#をつけます。カレントページのアンカーへリンクを貼る場合はページ名を省略することができます。 [[エイリアス名 http //www.example.com/]] [[エイリアス名 https //www.example.com/]] [[エイリアス名 ftp //ftp.example.com/]] [[エイリアス名 news //news.example.com/]] [[エイリアス名 foo@example.com]] [[エイリアス名 InterWikiName ページ名]] [[エイリアス名 InterWikiName ページ名#アンカー名]] エイリアスをURLやInterWikiと組み合わせることもできます。 [[エイリアス名 http //www.example.com/]] [[エイリアス名 https //www.example.com/]] [[エイリアス名 ftp //ftp.example.com/]] [[エイリアス名 news //news.example.com/]] [[エイリアス名 foo@example.com]] URLを指定する場合は、 の代わりに も使用できます。 エイリアス名の中には、全角文字を含めることができます。 エイリアス名の中には、半角空白文字を含めることができます。 階層化されたページでは、ページ名を相対指定することができます。 エイリアスは、他のインライン要素の子要素になることができます。 エイリアスは、他のインライン要素を子要素にできます。 タブコード t; 行中で t; と書くと、タブコードに置換されます。 通常、フォーム内ではキーボードからタブコードを直接入力できない(*4)ので、タブコードを入力したい位置に t;を記述すると、保存時にタブコードに置換します。 タブコードは、記事が書き込まれるときに置換されて記録されます。 タブコードは、他のインライン要素の子要素になることができます。 タブコードは、他のインライン要素を子要素にはできません。 ページ名置換文字 page; fpage; 行中で page; 及び fpage; と書くと、編集中のページ名に置換されます。ページ名が階層化されたページで「hogehoge/hoge」となっている場合、 page; は「hoge」に、 fpage; は「hogehoge/hoge」に置換されます。階層化されていないページでは、 page; も fpage; も同じになります。 ページ名置換文字は、記事が書き込まれるときに置換されて記録されます。 ページ名置換文字は、他のインライン要素の子要素になることができます。 ページ名置換文字は、他のインライン要素を子要素にはできません。 日時置換文字 date; time; now; 行中で date; と書くと、更新時の日付に置換されます 行中で time; と書くと、更新時の時刻に置換されます 行中で now; と書くと、更新時の日時に置換されます date? time? now? PukiWiki 1.3系との後方互換性のために、 date #63;、 time #63;、 now #63; についても使用できるようにしてあります。 date;、 time;、 now;は、記事が書き込まれるときに置換されて記録されます。 date;、 time;、 now;は、他のインライン要素の子要素になることができます。 date;、 time;、 now;は、他のインライン要素を子要素にはできません。 _date; _time; _now; 行中で _date; と書くと、表示時の日付に置換されて出力されます。 行中で _time; と書くと、表示時の時刻に置換されて出力されます。 行中で _now; と書くと、表示時の日時に置換されて出力されます。 lastmod; lastmod(ページ名); 行中で lastmod; と書くと、そのページの最終更新日時に置換されて出力されます。 ページ名を指定すると、その指定されたページの最終更新日時に置換されて出力されます。 _date;、 _time;、 _now;、 lastmod;は、記事が表示されるときに置換されて出力されます。 _date;、 _time;、 _now;、 lastmod;は、他のインライン要素の子要素になることができます。 _date;、 _time;、 _now;、 lastmod;は、他のインライン要素を子要素にはできません。 文字参照文字 文字参照は、SGMLで定義されている文字参照文字( copy;や reg;など)のほか、下記の独自の文字参照文字が使用できます。 heart; smile; bigsmile; huh; oh; wink; sad; worried; 行中で heart;と書くと、ハートマーク heart に置換されて出力されます。 行中で smile;と書くと、 smile に置換されて出力されます。 行中で bigsmile;と書くと、 bigsmile に置換されて出力されます。 行中で huh;と書くと、 huh に置換されて出力されます。 行中で oh;と書くと、 oh に置換されて出力されます。 行中で wink;と書くと、 wink に置換されて出力されます。 行中で sad;と書くと、 sad に置換されて出力されます。 行中で worried;と書くと、 worried に置換されて出力されます。 文字参照文字は、表示されるときに置換されます。 文字参照文字は、他のインライン要素の子要素になることができます。 文字参照文字は、他のインライン要素を子要素にはできません。 数値参照文字 #10進数; #x16進数; 行中で # と ; の間に10進数を、 #x と ;の間に16進数を書くと、Unicodeを数値参照して表示します。キーボードから直接入力できない文字やJIS第3水準・第4水準の文字などの表示に使用します。たとえば、内田百 #38290;と入力すると、内田百 #38290;と表示されます。 数値参照文字は、表示されるときに置換されます。 数値参照文字は、他のインライン要素の子要素になることができます。 数値参照文字は、他のインライン要素を子要素にはできません。 16進数は半角小文字で指定する必要があります(XHTML 1.0 第2版から小文字に限定されました)。 その他 コメント行 // コメント 行頭で // を指定すると、コメント行になります。コメント行は出力されない行です。 コメント行は、他の要素と無関係に行単位でどの位置にも記述できます。 コメント行は、前後の他の要素に何ら影響を及ぼしません。
https://w.atwiki.jp/xbox360score/pages/2044.html
Payday2 項目数：43 総ポイント：1000 難易度： Payday2 @wiki http //wikiwiki.jp/payday2/?FrontPage Coming in Hot On day 1 of the Watchdogs job, don t let the cops shoot and destroy the escape vehicle.WATCHDOGS DAY1で、警察に逃走車両を撃たせず破壊させない。 10 Fish A.I. On day 2 of the Watchdogs job, throw a loot bag into the sea, hoping fish move away as it gets near.WATCHDOGS DAY2で、鞄を海に投げ入れる。 10 F in Chemistry On day 1 of the Rat job, blow up the lab.RATS DAY1で、麻薬工場を爆破する。 10 Caribbean Pirate On day 2 of the Rat job, bring additional meth bags to the trade, but steal your payment instead.RATS DAY2で、取引で追加のMethを渡し、代わりに報酬を盗む。 30 Short Fuse On day 3 of the Rat job, get away with 7 bags without defusing any bombs.RATS DAY3で、C4を解除せずに鞄を7つ手に入れる。 20 Painting Yourself Into a Corner On day 1 of the Framing Frame job, steal all sold paintings without being seen. FRAMING FRAME DAY1?で、発見されずに全ての絵画を盗む。 40 Big Deal On day 2 of the Framing Frame job, trade 9 paintings.FRAMING FRAME DAY2?で、9つの絵画を取引する。 20 I Wasn t Even There! On day 3 of the Framing Frame job, send the gold by zip-line without ever tripping the alarm.FRAMING FRAME DAY3?で、アラームを作動させずにzip-lineで金塊を送る。 40 I Knew What I Did Was Wrong On day 1 of the Big Oil job, enter the basement, open the ATM machines and take the loot.BIG OIL DAY1で、地下室に侵入してATMを解錠し、金を盗む。 10 Doctor Fantastic On day 2 of the Big Oil job, complete the heist with the first engine being correct.BIG OIL DAY2で、最初に選んだ正しいエンジンで強盗を完遂する。 30 Diamonds are Forever In the Jewelry store job, steal and secure 4 bags without the escape car leaving the first time.JEWELRY STOREで、逃走車が離れずに鞄を4つ盗みだし確保する。 20 Let s do Th... In the Ukranian job, complete the heist within 35 seconds.UKRANIAN JOBで、35秒以内に強盗を完遂する。 30 Yeah he s a Gold Digger In the Four Stores job, find a gold bar in a safe.FOUR STORESで、金庫から金の延べ棒を見つける。 20 I m Going All-in! In the Nightclub job, put a bag filled with money on the poker table.NIGHTCLUBで、ポーカーテーブル上に札束の詰まった鞄を置く。 10 Shoot the Glass! In the Mallcrasher job, destroy all windows in the mall.MALLCRASHERで、モール内の全ての窓を破る。 10 Lord of War On day 1 of the Firestarter job, steal all the weapons from the hangar.FIRESTARTER DAY1で、格納庫から全ての武器を盗む。 30 Guessing Game On day 2 of the Firestarter job, complete the heist in stealth without hacking the computer.FIRESTARTER DAY2で、コンピュータをハッキングせずにステルスを完遂する。 40 The First Line On day 3 of the Firestarter job, find the rare hockey poster of the OVERKILL hockey team.FIRESTARTER DAY3で、OVERKILLホッケーチームのレアポスターを探す。 30 King of the Hill In the Park escape, ensure that no law enforcement enters the park before the escape van arrives.PARK ESCAPEで、逃走用車両が到着する前に公園内に警察を突入させない。 30 You Shall not Pass! In the Overpass escape, don t let the cops set foot on the bridge before you can escape.OVERPASS ESCAPEで、脱出する前に橋に警察を突入させない。 30 Cappuccino to go, Please In the Cafe escape, secure all loot and escape within 30 seconds of the escape van arriving.CAFE ESCAPEで、逃走用車両が到着してから30秒以内に全ての戦利品を確保して逃走する。 20 Bullet Dodger In the Street escape, complete the escape without killing any enemy snipers.STREET ESCAPEで、敵スナイパーを排除せずに逃走を完遂する。 40 They see me Baggin , They Hatin On the Garage escape, get away with 8 bags.GARAGE ESCAPEで、8つの鞄を持って逃走する。 20 Tip the Scales In the safe house, find the hidden basement.SAFE HOUSEで、秘密の地下室を見つける。 10 How do you Like me Now? Equip an armor for the first time.初めてアーマーを装備する。 10 Man of Iron Equip the Improved Combined Tactical Vest.Improved Combined Tactical Vestを装備する。 40 Would you Like Your Receipt? Buy a weapon for the first time.初めて武器を購入する。 10 Armed to the Teeth Modify a weapon for the first time.初めて武器を改造する。 10 Fully Loaded Own 9 weapons.武器を9個所有する。 10 Weapon Collector Own 18 weapons.武器を18個所有する。 20 ▲ ▼ Masked Villain Modify a mask for the first time. 初めてマスクを改造する。 ▲ ▼ No one Cared who I Was... Until I put on the mask. 初めてマスクを被る。 ▲ ▼ I got it, I got It! Catch a bag mid-air. 空中で鞄を受け取る。 ▲ ▼ No Turning Back Complete your first job. 最初のJobを完遂する。 ▲ ▼ I m a Healer-Tank-Damage-Dealer Spend 10 skill points in each skill tree. 各スキルツリーに10ポイント使う。 ▲ ▼ Spend Money to Make Money Spend $1.000.000 in total cash. 総額100万ドル分を支払う。 ▲ ▼ Going Places Gain $1.000.000 in total spendable cash. 現金が100万ドルに到達する。 ▲ ▼ You Gotta Start Somewhere Reach reputation level 5. REP 5に到達する。 ▲ ▼ Guilty of Crime Reach reputation level 10. REP 10に到達する。 ▲ ▼ Smooth Criminal Reach reputation level 25. REP 25に到達する。 ▲ ▼ Armed and Dangerous Reach reputation level 50. REP 50に到達する。 ▲ ▼ Career Criminal Reach reputation level 75. REP 75に到達する。 ▲ ▼ Most Wanted Reach reputation level 100. REP 100に到達する。
https://w.atwiki.jp/oborotukiyo/pages/4.html
Clouded・Moonの紹介 朧月夜同盟の盟主血盟であり、通称「CM」と呼ばれています。 したらば板などでは、戦争クランとして名を挙げていただいておりますが、元々は何でもありのクランです。 なお、CMには盟主はおらず、麺主が「念慈」、麺主代行は「Starseeker」となっております。 ■Cloded･MoonのHP ***懐かしの一場面*** ***麺主からの一言*** ***血盟員紹介*** ■念慈? ■BloomBloom? ■コヒメ? ■ディア? ■琥姫? ■A55 ■Kerry? ■けんぞー? ■小悪魔りん? ■灯華? ■KNIGH ■推定無罪? ■zxsixr? ■ヴェリ? ■じぜまじ? ■いそっぷ? ■へぽ? ■ROMEO? ■練無? ■琥珀竜? ■Starseeker ***一言連絡板*** 名前 コメント すべてのコメントを見る Lineage (R) II and Lineage (R) II the Chaotic Chronicle are registered trademarks of NCsoft Corporation. 2002-2006 (c) Copyright NCsoft Corporation. NC Japan K.K. was granted by NCsoft Corporation the right to publish, distribute, and transmit Lineage II the Chaotic Chronicle in Japan . All Rights Reserved. ※このＨＰは無料レンタルｗｉｋｉのため強制的に広告が掲載されています（コンテンツ上一部不適切な広告があります）